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背景食管癌在我国为高发的恶性肿瘤之一,发病率在我国癌症构成中位居第6位,在患者死亡排列中位居第4位,严重影响了我国人民的身心健康和生活水平,并给社会造成一定负担。目前,我国食管癌病理类型中,以鳞状细胞癌居多,大约为90%,而腺癌较少,占不到10%,小细胞癌、未分化癌等病理类型相对较少。激活性蛋白激酶 C 受体 1(Receptor for activated C kinase 1,RACK1)是许多激酶和受体的支架蛋白,并作为穿梭蛋白在细胞间隙锚定中起着关键作用,在特定位置参与转录/翻译事件并稳定蛋白质活性。而且,RACK1在多个信号通路中起中介作用,这些信号通路互连不同的信号通路以调控必需的细胞生理过程,即细胞生长、增殖、迁移、粘附、分化、信号转导和免疫反应等。细胞外信号调节激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)是促分裂原激活蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)的一部分,是控制细胞有丝分裂、存活、凋亡、分化和代谢的保守蛋白家族。ERK1/2信号通路增加了分化细胞、种系干细胞和癌症干细胞的增殖,并成为细胞增殖,迁移和凋亡的关键调节因子。目的本研究主要分析RACK1在食管鳞癌组织中的表达水平,以及其表达变化与食管鳞癌Eca109细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力之间的关系,并探讨了 RACK1是否能通过ERK1/2信号通路调控食管鳞癌Eca109细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭能力,以期通过阐明RACK1对食管鳞癌生物活性的分子调控机制,为食管鳞癌早期诊断和预防提供一些新的研究思路。方法1.采用qRT-PCR和western blot检测食管鳞癌组织和癌旁组织中RACK1的mRNA和蛋白质表达水平,采用免疫组织化学方法检测食管鳞癌组织中RACK1的蛋白表达分布,采用SAS 9.0软件分析RACK1表达的临床意义及相关性。2.采用western blot和qRT-PCR筛选高效的RACK1 siRNA载体,为后续实验做准备。实验共设计3组,包括对照组、阴性对照组和siRNA RACK1组;分别分析各组食管鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移侵袭情况,并采用western blot和qRT-PCR检测技术分析增殖、凋亡、迁移和侵袭力相关的蛋白和基因表达水平。3.利用qRT-PCR和western blot检测食管鳞癌细胞中的ERK1/2信号通路的激活状态;siRNA敲低食管鳞癌细胞中RACK1表达,采用western blot分析其对ERK1/2信号通路有关蛋白的影响。结果1.RACK1蛋白和mRNA在食管鳞癌组织中高表达。RACK1蛋白表达增高与食管鳞癌病理分级、淋巴结转移、临床分期密切相关(P<0.05);而与患者性别、年龄、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。2.敲低RACK1表达可抑制食管鳞癌Eca109细胞增殖,降低增殖相关蛋白ki67、PCNA蛋白表达水平,促进食管鳞癌Eca109细胞凋亡,升高凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平,降低Bax蛋白表达水平。3.敲低RACK1表达水平可抑制食管鳞癌ECA109细胞迁移、侵袭,降低食管鳞癌细胞中侵袭相关蛋白MMP-9、MMP-3蛋白表达水平。4.RACK1通过调控ERK1/2信号通路刺激食管鳞癌Eca109细胞增殖。与对照组比较,siRNA RACK1能降低RACK1、MEK、ERK2、P90RSK mRNA水平(P<0.05),下调 RACK1、p-Mek、p-ERK2、p-P90RSK 蛋白水平(P<0.05)。与siRNA Cullin7 2组相比,siRNA RACK1联合ERK1/2信号通路抑制剂PD98059处理后,细胞抑制率明显增加(P<0.05),RACK1、p-Mek、p-ERK2、p-P90RSK蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论1.RACK1高表达与食管鳞癌发生发展密切相关。2.降低RACK1表达抑制食管鳞癌Eca109细胞增殖、迁移和侵袭,但促进其凋亡。3.RACK1通过激活ERK1/2信号通路调控食管鳞癌Eca109细胞生物学功能,在一定程度上参与了食管鳞癌的发生和进展。