【摘 要】
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牙骨质是覆盖在牙根表面的一层矿化组织,是牙周膜附着的重要结构。对牙骨质实现有效的再生调控仍然存在一定困难,也是目前口腔领域研究热点之一。锂离子是Wnt经典通路的激活剂,有研究证实其能够促进牙周膜细胞向成骨/成牙骨质方向分化,可能会促进牙周组织再生。但是关于锂离子对牙骨质再生的作用效果还不完全清楚,另外目前还缺乏利用锂离子对牙周组织再生进行调控的有效方式。为了探究这些问题,本研究设计了以下实验:1.
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牙骨质是覆盖在牙根表面的一层矿化组织,是牙周膜附着的重要结构。对牙骨质实现有效的再生调控仍然存在一定困难,也是目前口腔领域研究热点之一。锂离子是Wnt经典通路的激活剂,有研究证实其能够促进牙周膜细胞向成骨/成牙骨质方向分化,可能会促进牙周组织再生。但是关于锂离子对牙骨质再生的作用效果还不完全清楚,另外目前还缺乏利用锂离子对牙周组织再生进行调控的有效方式。为了探究这些问题,本研究设计了以下实验:1.锂离子对成牙骨质细胞功能的影响:目的:研究锂离子对成牙骨质细胞增殖及分化功能的影响。方法:体外培养小鼠永生化成牙骨质细胞OCCM-30细胞。制备锂离子条件培养基,终浓度分别为10m M、5m M、2.5m M、1.25m M、0m M。采用MTT法筛选出锂离子作用于成牙骨质细胞的适宜浓度范围;钙黄素-AM染色观察成牙骨质细胞活细胞形态;茜素红染色及定量分析检测成牙骨质细胞体外矿化的程度;检测碱性磷酸酶的表达;Western Blot检测不同浓度锂离子作用下BMP-2的表达;免疫荧光染色检测成牙骨质细胞表达BMP-2蛋白的情况。结果:锂离子对成牙骨质细胞的增殖及细胞形态无明显影响,与锂离子作用浓度及作用时间无关;碱性磷酸酶的表达随着锂离子作用浓度增加而受到抑制;茜素红染色及定量分析结果也显示了相同的趋势。WB及免疫荧光染色结果显示成牙骨质细胞表达的BMP-2的量减少,与锂离子作用浓度有关,但与锂离子作用时间无关。结论:锂离子对成牙骨质细胞的增殖无影响,但对其分化具有抑制作用。BMP-2下调也参与到此过程中,这也可能是Wnt信号通路以外的一种潜在调节机制。2.炎症微环境中锂离子对成牙骨质细胞功能的影响:目的:研究在脂多糖存在的情况下,锂离子对成牙骨质细胞增殖及分化功能的影响。方法:采用脂多糖在成牙骨质细胞中诱导出牙周炎模型。在脂多糖存在情况下,通过MTT法观察锂离子的细胞毒作用;通过碱性磷酸酶分析和茜素红染色来观察锂离子对成牙骨质细胞分化的影响;RT-PCR法及Elisa法检测RANKL和OPG蛋白的表达情况。结果:在脂多糖和锂离子共同存在的情况下,与锂离子对正常成牙骨质细胞的诱导作用相比,成牙骨质细胞的增殖和分化都被下调。此外,锂离子通过调节OPG/RANKL比率来改变破骨细胞形成过程。结论:在脂多糖诱导的牙周炎模型中,锂离子能够下调成牙骨质细胞的增殖和分化。3.锂离子掺杂PGS支架的设计及合成:目的:利用锂离子的细胞作用特异性,合成锂离子掺杂的PGS支架。方法:在PGS交联过程中加入锂离子,合成掺杂有锂离子的PGS支架,通过FITR分析结构性能,ICP-OES测量锂的含量,TGA分析其热性能,接触角分析材料亲水性,SEM-EDS分析支架形态、成分及孔隙率,失重率分析其降解性能。结果:PGS-Li系列支架与PGS支架有着相似的组成和结构,基本满足组织工程支架材料的要求,并且在亲水性、热稳定性方面展现出了优于PGS支架的性能。结论:成功构建了PGS-Li支架,为牙周组织再生特别是牙骨质的再生提供了新思路。
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