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羊肚菌(Morehella esculenta)是一种著名的食药用真菌,具有广阔的开发利用前景,但至今羊肚菌的完全人工栽培还没有很大的突破。近年来已有不少半人工栽培成功的案例,成功的羊肚菌半人工栽培常常要求覆盖有羊肚菌发生过的土壤,这可能是由于覆土中存在刺激其结实的有益微生物,因此找到有助于其结实的关键微生物种类,尽可能模仿其野生环境,这或许是羊肚菌栽培成功的捷径之一。本文对羊肚菌子实体进行了组织分离,期望可以分离到与羊肚菌紧密结合的其他种真菌,考察这些真菌与子实体形成生长之间的关联。另对六份羊肚菌栽培土样,建立真菌28S rDNA文库,利用现代分子生态学的方法快速准确地对土样中的真菌群落结构进行检测。统计分析各真菌类群,以期找出与羊肚菌生长密切相关的优势种群。再与羊肚菌组织分离所得的真菌比较,寻求两者间的对应关系,找到两者间的异同,从而为今后实现羊肚菌人工栽培提供一定的参考依据,主要研究成果如下：1.对4个羊肚菌子实体进行了组织分离,得到39株菌株。对39株菌株的ITS区域进行测序和分析比较,结果显示供试的39个菌株中33株ITS区域长度为738bp,经过BLAST比对后均为羊肚菌菌株；另外的6个菌株编号分别为3、5、6、23、24、37,其中3号菌株比对结果为Talaromyces trachyspermus,相似度达100%,5、23、37三个菌株比对结果均为Botryotinia fuckeliana,剩下的6、24号菌株,比对结果分别为Cordyceps sinensis、Mortierella alpina,相似度都达到99%以上。2.在云南维西县以及迪庆州霞若乡羊肚菌半人工栽培基地采集相应土样,提取土样总DNA、PCR扩增28S rDNA片段,再用PCR产物直接克隆建库,通过大规模的测序比对,了解各土样间真菌群落的差异。其中的WX-1、XR-1、XR-2、XR-3四个土样,克隆子数目大于5的菌株中,比对后为子囊菌亚门盘菌纲,粪壳菌纲,锤舌菌纲真菌；还有部分为壶菌门真菌；担子菌、接合菌真菌。WX-1、XR-3土样的多样性指数接近,XR-1、XR-2两土样的多样性指数接近；但是四个文库之间数据相互比较,差别也不大。土样XR-4、XR-5比较发现羊肚菌出菇土壤附近和不出菇土壤,虽相距仅10m左右,但是真菌群落丰度和种类存在明显差异；连续两年对同一羊肚菌栽培基地采样,即文库C和F,比较发现,文库C的真菌群落多样性明显高于F,而且两者丰度高的真菌类群存在明显差异。其中文库中Morchella conica的丰度越高,所对应土样采集地的羊肚菌产量也高。3.羊肚菌子实体组织分离得到的6号菌株,在土样XR-3中丰度为1.69%；分离到的24号菌株在土样WX-1中丰度为4.88%；5、23、37比对后均在土样WX-1中丰度为2.44%,在土样XR-2中丰度为1.68%。这3个菌株在子实体中可以分离到,同时在土样中也有相应的克隆子出现,但是并不能形成良好的对应关系,即来源于某子实体的真菌,并不一定会出现在与子实体对应的土样所建的文库中。目前虽只知道简单的对应关系,不能下任何实质性的结论。但这3种真菌很有可能在羊肚菌结实过程中起作用,但具体起什么作用,要进行后续实验。