【摘 要】
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目的：本研究在模式生物斑马鱼中开展,旨在围绕Yap在斑马鱼胚胎早期发育中的作用进行初步探讨.为人类胚胎发育异常和出生缺陷的积极预防和筛查提供一定依据.方法：利用显微注射特异性吗啡啉(MO)的方法进行YAP基因的功能阻抑.采用胚胎整体TUNEL(terminal deoxynucleotide transferase mediated dUTP nick-end labeling)方法进行凋亡检测.
【机 构】
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复旦大学附属儿科医院 复旦大学分子遗传学实验室
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的：本研究在模式生物斑马鱼中开展,旨在围绕Yap在斑马鱼胚胎早期发育中的作用进行初步探讨.为人类胚胎发育异常和出生缺陷的积极预防和筛查提供一定依据.方法：利用显微注射特异性吗啡啉(MO)的方法进行YAP基因的功能阻抑.采用胚胎整体TUNEL(terminal deoxynucleotide transferase mediated dUTP nick-end labeling)方法进行凋亡检测.采用胚胎整体PH3(phospho-histone H3,磷酸化组蛋白H3)抗体显色的方法进行细胞增殖分化检测.构建基因探针后采用胚胎整体原位杂交的方法、以及采用半定量PCR、Western blot的方法进行基因表达水平的检测.结果：YAP的功能进行阻抑后,胚胎早期发育受到明显干扰.在细胞水平,YAP抑制凋亡,促进细胞分化.在胚胎整体水平,YAP功能阻抑后造成胚胎原肠胚形成、心脏发育、肝脏发育、体节发育等的明显延迟和异常.gsc在胚胎腹侧的表达降低,gata2在胚胎背侧的表达范围扩大.对YAP功能阻抑后,斑马鱼Hpo信号通路的目的靶基因的表达情况进行检测的结果发现,Hpo信号通路因子ccne2的表达水平下调.结论：YAP对于胚胎早期发育十分关键.研究发现斑马鱼YAP可调控细胞增殖分化和凋亡,并对于腹-背轴发育、原肠胚的形成、心脏发育、肝脏发育和体节发育等有重要意义.YAP可能通过影响Hpo信号通路而对胚胎早期发育有调控作用.胚胎体内YAP功能异常是胚胎发生发育畸形的高危因素.
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