【摘 要】
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近年来,随着生物信息学与基因组学的发展,研究发现并不是所有的转录产物都具有编码功能。其中长链非编码RNA（long noncoding RNA,lnc RNA）是指长度大于200 nt,不具备蛋白质编码功能的一类RNA。但其能够在多个生物学水平上对基因表达进行调控。ihha-as（indian hedgehog signaling molecule a antisense）是存在于编码基因ihha
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近年来,随着生物信息学与基因组学的发展,研究发现并不是所有的转录产物都具有编码功能。其中长链非编码RNA（long noncoding RNA,lnc RNA）是指长度大于200 nt,不具备蛋白质编码功能的一类RNA。但其能够在多个生物学水平上对基因表达进行调控。ihha-as（indian hedgehog signaling molecule a antisense）是存在于编码基因ihha（indian hedgehog signaling molecule a）附近的一条单外显子反义长链非编码RNA,研究发现ihha在斑马鱼发育和代谢过程中有着非常重要的作用。但是其反义lnc RNA ihha-as在斑马鱼早期胚胎和心血管发育过程中的作用至今没有报道。因此本研究旨在确定ihha-as在斑马鱼早期胚胎和心血管发育中的作用。为了探究ihha-as在斑马鱼早期胚胎和心血管发育中的作用,我们进行了一些研究。首先对ihha-as进行了生物信息学分析;其次利用q PCR和原位杂交确定了ihha-as在斑马鱼中的时空表达;然后观察了ihha-as过表达后对斑马鱼早期发育和心血管标志基因的影响;最后利用原位杂交和q PCR检测了morpholino干扰以及ihha-as挽救后对心血管形态、ihha-as的正义编码基因ihha和心血管发育标记基因表达的影响。结果显示,ihha-as是由斑马鱼9号染色体产生的一个具有极高保守性的反义lnc RNA;时空表达发现ihha-as在斑马鱼不同发育时期和成鱼不同器官中都具有一定的表达,尤其在心脏和脑中含量较高;过表达后,斑马鱼胚胎未发生明显的形态和功能变化,但是心房特异性肌球蛋白重链（atrium-specific myosin heavy chain,amhc）、心室特异性肌球蛋白重链（ventricular myosin heavy chain,vmhc）、心肌轻链蛋白基因（cardiae myosin light chain 2,cmlc2）和血管内皮生长因子受体（Fetal liver kinase 1,flk1）等心血管标记基因均有所上调;ihha-as-MO敲低后,斑马鱼出现心包水肿、心脏出血和骨骼弯曲等症状,心血管标记基因的表达量明显下调,原位杂交表明敲低后心脏未环化、心血管发育变慢;ihha-as挽救后,斑马鱼畸形症状有所缓解,心血管标记基因的表达量上升,心血管发育异常得到改善;最后ihha-as敲低后,编码基因ihha表达量明显增加,挽救后表达大幅度下降。这些结果表明长链非编码RNA ihha-as通过影响ihha表达,来调控斑马鱼早期心血管发育。本研究对lnc RNA在斑马鱼早期心血管发育过程中的相关分子机制及生物学功能提供了一定的实验依据。
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