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山楂为蔷薇科山楂属植物,2015版《中华人民共和国药典》中收载的入药山楂品种为山里红CrataeguspinnatifidaBge.var.majorNEBr.和山楂CrataeguspinnatifidaBge.,其果、叶均可入药,山楂果是传统药食两用的中药,具有消食健胃,行气散瘀,化浊降脂的功效,山楂叶具有活血化瘀,理气通脉,化浊降脂功效。肥胖诱发的糖脂代谢紊乱是引发心血管疾病的危险因素,缺乏早期预警和有效防治药物,因此发挥中药治疗糖脂代谢紊乱性疾病的优势与特色至关重要。山楂果叶化学成分的相关性和差异性是两个药用部位发挥不同功效的物质基础,国内外对山楂防治糖脂代谢紊乱作用的研究尚欠缺对不同部位的系统分析和预防糖脂代谢紊乱作用的考察。本论文考察了2019年采集的不同产地、品种及采收时间山楂叶的品质,建立了同时测定山楂叶5个黄酮类成分的分析方法,建立了山楂果叶不同部位连续提取的工艺,并比较了山楂果、叶不同组份对高糖脂膳食诱导肥胖小鼠的预防作用,为山楂果、叶优质资源的开发利用提供基础依据。研究内容如下:
1.分析山楂叶黄酮类成分的动态变化,综合评价山楂叶的品质。采用紫外分光光度法和HPLC法测定6月至10月份采自河北、山东、辽宁、山西、宁夏5个产地,铁山楂、雾灵红、大金星、小金星、野山楂5个品种共43批山楂叶的总黄酮(HLF)和牡荆素葡萄糖苷(GLV)、牡荆素鼠李糖苷(RHV)、牡荆素(VIT)、芦丁(RUT)、金丝桃苷(HP)5个黄酮类成分的含量。结果表明河北产区铁山楂叶品质较佳,可选择而9月至10月对海拔350m-500m种植地的山楂叶进行采摘。
2.建立同时测定山楂叶5个不同黄酮类成分的“一测多评”分析方法。该方法专属性强,灵敏度高,分析速度快,目标化合物分离度良好,峰形对称,杂质峰较少。以RHV为内参物,GLV、RUT、VIT、HP4个黄酮类成分的RCF值分别为1.586、2.266、3.374和1.267,RSD均小于2%。且RCF值在Hanbon、Agilent、Dikmat3种不同色谱柱下重现性良好。采用一测多评法与外标法分别测定12批山楂叶样品中5个黄酮类成分的含量,测定结果无明显差异,为山楂叶有效成分的定量分析提供了可靠手段。
3.建立山楂果、叶不同组份的连续提取和分离方法。采用UPLC-PDA/MS/ELSD法对不同提取组份的化学成分进行分析,发现山楂果以40%乙醇为溶剂结合水提醇沉法可得到分别以多糖(FB)、黄酮(FC)及三萜类成分(FA)为主的不同组份;山楂叶先水提得多糖(LB)和黄酮(LC)组份,再以70%乙醇为溶剂提取残渣中三萜(LA)组份。采用紫外分光光度法和HPLC法含量测定结果表明山楂果主要含多糖类成分,三萜酸类成分次之,黄酮类含量相对最低;山楂叶黄酮种类丰富,亦含有大量多糖。
4.比较山楂果、叶不同组份对高糖脂膳食诱导肥胖小鼠的预防作用。建立高脂高糖饲料联合葡萄糖水饮食诱导的肥胖小鼠模型,造模的同时给予山楂果、叶不同组份提取物、山楂果总提取物(FW)和山楂叶总提取物(LW),4周后山楂果、叶不同组份可预防血糖和TC升高,降低脂肪堆积和体脂指数,维持脂肪组织正常形态。山楂叶预防血糖升高的作用优于山楂果,LW预防血糖升高的作用最明显,相比Mod组降低了40.10%,LC预防血糖升高的作用优于LA和LB。山楂果不同组份也有一定的降糖作用,效果弱于山楂叶。山楂叶各组份均能够显著降低肥胖小鼠血清TC水平,LC能够升高HDL-C、降低LDL-C水平,LM的综合作用较好。山楂果各组份均能够显著降低肥胖小鼠血清TC水平,FB还能够降低小鼠血清中TG含量,FA和FC能够降低LDL-C含量,FM作用明显优于山楂果单组份和FW。山楂果预防血脂升高的作用优于山楂叶。
5.LC、LM、FM和FW可降低肝脏指数,山楂叶各组份均可提高脾脏指数,作用强于山楂果各组份,以LB作用最明显。
1.分析山楂叶黄酮类成分的动态变化,综合评价山楂叶的品质。采用紫外分光光度法和HPLC法测定6月至10月份采自河北、山东、辽宁、山西、宁夏5个产地,铁山楂、雾灵红、大金星、小金星、野山楂5个品种共43批山楂叶的总黄酮(HLF)和牡荆素葡萄糖苷(GLV)、牡荆素鼠李糖苷(RHV)、牡荆素(VIT)、芦丁(RUT)、金丝桃苷(HP)5个黄酮类成分的含量。结果表明河北产区铁山楂叶品质较佳,可选择而9月至10月对海拔350m-500m种植地的山楂叶进行采摘。
2.建立同时测定山楂叶5个不同黄酮类成分的“一测多评”分析方法。该方法专属性强,灵敏度高,分析速度快,目标化合物分离度良好,峰形对称,杂质峰较少。以RHV为内参物,GLV、RUT、VIT、HP4个黄酮类成分的RCF值分别为1.586、2.266、3.374和1.267,RSD均小于2%。且RCF值在Hanbon、Agilent、Dikmat3种不同色谱柱下重现性良好。采用一测多评法与外标法分别测定12批山楂叶样品中5个黄酮类成分的含量,测定结果无明显差异,为山楂叶有效成分的定量分析提供了可靠手段。
3.建立山楂果、叶不同组份的连续提取和分离方法。采用UPLC-PDA/MS/ELSD法对不同提取组份的化学成分进行分析,发现山楂果以40%乙醇为溶剂结合水提醇沉法可得到分别以多糖(FB)、黄酮(FC)及三萜类成分(FA)为主的不同组份;山楂叶先水提得多糖(LB)和黄酮(LC)组份,再以70%乙醇为溶剂提取残渣中三萜(LA)组份。采用紫外分光光度法和HPLC法含量测定结果表明山楂果主要含多糖类成分,三萜酸类成分次之,黄酮类含量相对最低;山楂叶黄酮种类丰富,亦含有大量多糖。
4.比较山楂果、叶不同组份对高糖脂膳食诱导肥胖小鼠的预防作用。建立高脂高糖饲料联合葡萄糖水饮食诱导的肥胖小鼠模型,造模的同时给予山楂果、叶不同组份提取物、山楂果总提取物(FW)和山楂叶总提取物(LW),4周后山楂果、叶不同组份可预防血糖和TC升高,降低脂肪堆积和体脂指数,维持脂肪组织正常形态。山楂叶预防血糖升高的作用优于山楂果,LW预防血糖升高的作用最明显,相比Mod组降低了40.10%,LC预防血糖升高的作用优于LA和LB。山楂果不同组份也有一定的降糖作用,效果弱于山楂叶。山楂叶各组份均能够显著降低肥胖小鼠血清TC水平,LC能够升高HDL-C、降低LDL-C水平,LM的综合作用较好。山楂果各组份均能够显著降低肥胖小鼠血清TC水平,FB还能够降低小鼠血清中TG含量,FA和FC能够降低LDL-C含量,FM作用明显优于山楂果单组份和FW。山楂果预防血脂升高的作用优于山楂叶。
5.LC、LM、FM和FW可降低肝脏指数,山楂叶各组份均可提高脾脏指数,作用强于山楂果各组份,以LB作用最明显。