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目的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是由于鼻咽部黏膜上皮的恶性突变形成的新生物,在中国南部等地区高发。随着放化疗技术的精进,NPC的五年生存率已经有明显改善,但仍有部分患者因发现时已是晚期,或者因局部复发和远处转移而导致治疗失败。因此寻找广泛筛查和追踪NPC预后的分子标志物尤为重要。Ig样结构域2黏附分子(adhesion molecule with Ig like domain 2,AMIGO2)是AMIGO家族中的一员,作为一种跨膜粘附蛋白,最早在中枢神经系统中发现,此后研究表明作为促癌因子在多种肿瘤发生发展中起重要作用。本研究旨在探讨AMIGO2在NPC细胞增殖和转移中的作用及其机制。方法1.利用TCGA(the Cancer Genome Atlas)数据库分析AMIGO2 m RNA在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达情况及其与生存的关系。2.收集10份NPC组织和10位健康供者的鼻咽部黏膜上皮组织标本,以及NPC细胞系CNE-1、CNE-2、SUNE-1、6-10B、C666-1及人永生化鼻咽黏膜上皮细胞株NP69,用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q PCR)法检测NPC组织中AMIGO2 m RNA的表达情况。用Western blot与q PCR法分别测定NPC细胞系中AMIGO2的表达水平;通过慢病毒技术获得敲减AMIGO2的细胞株,用q PCR法检测其干扰效果;通过CCK-8法、细胞克隆形成实验检验敲减AMIGO2后对NPC细胞增殖的影响;细胞凋亡功能实验采用流式细胞术进行检测;用划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检验干扰AMIGO2表达对NPC细胞转移的影响。3.裸鼠实验检测干扰AMIGO2 m RNA后的SUNE-1细胞在肺转移瘤形成实验中的作用。4.等重同位素多标签相对定量蛋白质组学(isobaric tags for relative and absolute quantification,i TRAQ)分析方法用于鉴定干扰AMIGO2表达对CNE-2细胞相关分子的调控作用。5.用Western blot实验验证干扰AMIGO2表达对NPC细胞MAPK信号通路及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志分子的调控作用。结果1.TCGA数据库提示AMIGO2 m RNA在HNSCC(n=519)中表达量比正常组织样本(n=44)中的高,且高表达(高表达组n=130,中低表达组n=389)患者预后较差(均P<0.01)。2.AMIGO2在NPC组织和CNE-2、SUNE-1细胞中高表达。通过慢病毒技术敲减NPC细胞株CNE-2和SUNE-1的AMIGO2的水平,敲减效率达50%以上(均P<0.05),且细胞出现上皮样形态改变。敲减AMIGO2的表达,均可抑制CNE-2和SUNE-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力(均P<0.01)、并提高细胞的凋亡率(均P<0.01)。3.裸鼠肺转移模型提示干扰AMIGO2后SUNE-1细胞在裸鼠肺转移灶中的荧光素酶活性下降,转移灶数量减少,苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)结果提示肺组织中转移瘤面积占比减少(均P<0.05)。4.i TRAQ分析显示敲减AMIGO2的CNE-2细胞和未敲减组相比,共发现有77个蛋白分子下调和7个蛋白分子上调。其中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路当中的MAPK6,MAPK8IP3,DUSP3,TNIK,MAP4K3,HSPA8等蛋白信号分子下调。差异表达蛋白质聚类分析、基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路注释分析显示这些差异表达的蛋白在MAPK等信号通路存在显著差异。5.Western blot检测提示干扰AMIGO2表达降低了CNE-2、SUNE-1细胞中c-Raf、MEK1/2、Erk1/2的蛋白磷酸化水平,上调了E-cadherin的蛋白表达水平,下调了Slug、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、c-fos、c-myc、PAK1、MAPK6和MK5等分子的表达。结论1.正常鼻咽黏膜组织中AMIGO2 m RNA水平明显低于NPC组织。2.AMIGO2可能通过激活MAPK信号通路诱导NPC细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,并减少其凋亡率,提示AMIGO2可能是NPC治疗的潜在靶点。