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目的 Lnc RNAs与疾病的发生发展密切相关。肝纤维化是肝脏持续损伤及修复的病理过程,且巨噬细胞（KCs）在肝纤维化的发生发展过程中起重要作用。我们前期发现并证实了肝特异性的lnc RNA Lfar1可以通过激活肝星形细胞（HSCs）和诱导肝细胞（HCs）凋亡,导致肝纤维化。然而,lnc-Lfar1是否在KCs中异常表达,并通过调控KCs影响肝纤维化尚不明确。本研究通过构建小鼠肝纤维化模型并以慢病毒为载体的sh RNA沉默肝组织内lnc-Lfar1的水平,结合细胞水平实验,探究lnc-Lfar1是否通过调控KCs,影响肝纤维化及其作用机制,为肝纤维化的诊断和治疗提供新的靶点。方法1.进一步分析本实验室构建的肝纤维化小鼠模型的芯片结果,探求lnc RNALfar1与炎症相关基因的关系。2.小鼠腹腔注射四氯化碳（CCl4）0、1、2、4、8周,构建肝纤维化模型,提取肝脏中的Kuppfer细胞（KCs）,并通过激光共聚焦显微技术（confocal）检测F4/80等指标,验证KCs的纯度,然后检测lnc-Lfar1在KCs中的表达。3.用IFN-γ、LPS、IL-4和IL-10处理提取的正常小鼠原代KCs、骨髓来源的巨噬细胞（BMMs）和小鼠永生化的巨噬细胞系RAW264.7细胞,并检测lnc-Lfar1的表达。4.分别构建CCl4和胆管结扎（BDL）诱导的小鼠肝纤维化模型并沉默lnc-Lfar1,提取肝组织RNA和蛋白等。运用ELISA、IHC、western blot、q RT-PCR检测与巨噬细胞分化、炎症和细胞焦亡相关基因的表达。5.在提取的正常小鼠原代KCs、BMMs和RAW264.7细胞中沉默或过表达lnc-Lfar1,然后用LPS或IFN-γ处理以诱导巨噬细胞M1型分化,运用confocal、western blot、q RT-PCR检测巨噬细胞分化和炎症相关基因的表达。6.在正常小鼠原代KCs和BMMs中沉默或过表达lnc-Lfar1,然后用LPS/ATP或LPS/Nig处理以诱导NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡,运用ELISA、westernblot和q RT-PCR检测焦亡相关基因的表达。7.在KCs、BMMs和RAW264.7细胞中沉默或过表达lnc-Lfar1后,LPS或IFN-γ处理,用confocal、western blot、q RT-PCR检测NF-?B通路相关分子的表达。结果1.在CCl4诱导的肝纤维化模型中,沉默lnc-Lfar1会影响一系列免疫应答和IFN-γ相关的基因。2.用confocal检测F4/80+/α-SMA-/VEGFR2-的细胞,结果显示90%以上的细胞为KCs。小鼠腹腔注射CCl4注射一周时,KCs中lnc-Lfar1的表达下降,随后随CCl4注射时间延长又逐渐升高,8周时约为0周的1.6倍。3.Lnc-Lfar1在IFN-γ诱导的巨噬细胞M1型分化过程中下调,而在IL-4和IL-10处理后无明显变化。4.体内沉默lnc-Lfar1可减轻CCl4和BDL诱导的巨噬细胞M1型分化。5.沉默lnc-Lfar1可抑制LPS和IFN-γ诱导的巨噬细胞M1型分化,过表达lnc-Lfar1可加重LPS和IFN-γ诱导的巨噬细胞M1型分化。6.沉默lnc-Lfar1抑制LPS/ATP和LPS/Nig诱导的NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡,过表达lnc-Lfar1可加强LPS/ATP和LPS/Nig诱导的NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。7.Lnc-Lfar1通过NF-?B通路调节LPS和IFN-γ诱导的巨噬细胞M1型分化。结论 本研究揭示了体内沉默lnc-Lfar1,可以减轻CCl4和BDL诱导的巨噬细胞M1型分化和NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。此外,体外实验证实在巨噬细胞中沉默lnc-Lfar1抑制LPS和IFN-γ诱导的M1型分化,且抑制LPS/ATP和LPS/Nig诱导的NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。机制研究表明,lnc-Lfar1通过NF-?B通路调节LPS和IFN-γ诱导的巨噬细胞M1型分化。因此,lnc-Lfar1通过促进巨噬细胞M1型分化和焦亡,导致肝纤维化,为肝纤维化的诊断和治疗提供了新的靶点。