主要栽培食药用菌中核苷类成分的分析、富集及活性研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jinyu9782
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核苷类成分是生物细胞维持生命活动的基本组成物质,在动物、植物和微生物等生物中广泛存在,具有抗病毒、抗肿瘤和抑菌等多种生物活性,在医药领域已有广泛的应用。食药用菌是天然小分子活性化合物的重要来源,已对发现的特殊核苷类成分开展了部分研究,但针对不同食药用菌中核苷类成分的系统研究较少,为明确国内主要栽培食药用菌中的核苷类成分信息,本研究通过高效液相色谱法(HPLC)对食药用菌中的核苷类成分进行检测,结合其种属分类及指纹图谱特征进行了系统分析比较,并优化获得大孔吸附树脂分离富集核苷类成分的工艺,在制备获得不同食药用菌核苷类成分富集产物的基础上进行抑制肿瘤细胞增殖活性评价,以期为核苷类成分的研究与利用提供支撑。本论文的研究分为以下三方面:(1)收集市场上25个常见的食药用菌,利用HPLC法对其中13种核苷类成分的含量进行测定并使用指纹图谱对其进行分析,发现腺苷、尿苷和鸟苷是食药用菌中最常见、权重最高的组分,且不同种类的食药用菌中核苷类成分种类和含量差异较大,指纹图谱相似度超过80%的食用菌共11个,其中伞菌目口蘑科的香菇、榆黄菇、姬松茸、杏鲍菇、蟹味菇、白玉菇、金针菇和元蘑,核苷类成分的含量和指纹图谱相似度均较高,含量范围在4.31mg/g-12.84mg/g;蛹虫草、灰树花、羊肚菌和滑子菇的核苷类成分含量较高,分别为12.97mg/g、11.66mg/g、9.55mg/g和8.90mg/g,灵芝属、银耳属和木耳属的核苷类成分含量普遍较低,含量范围在0.17mg/g-3.17mg/g,且银耳属和木耳属食用菌的核苷种类存在一定差异,茶树菇与大部分食药用菌的相似度都较低,对照HPLC图谱发现茶树菇的核苷类成分多样性较好。选择核苷类成分含量在1mg/g以上的食药用菌进行主成分分析,由评价函数F=0.549F1+0.276F2+0.175F3计算各品种的综合评价分值,19种食药用菌中香菇的综合得分最高为5.4017,榆黄菇、灰树花的综合得分均超过5,说明其核苷类成分综合质量较高;而灵芝属的食药用菌综合得分均较低,含量范围在0.17mg/g~3.17mg/g,说明灵芝属的核苷类成分综合质量较低。(2)选择香菇子实体作为材料对核苷类成分的提取条件进行了优化,发现超声提取2h所得提取液中的核苷类成分含量是沸水提取法的4倍,且胞苷、鸟苷、尿苷、腺苷的含量较高。大孔树脂富集工艺优化结果显示,NKA-Ⅱ大孔树脂对核苷类成分的富集效果较好,其吸附率和解吸率均达到80%以上,在树脂添加量与提取液比例为20:100(g:mL)的条件下吸附2h,再以30%乙醇解吸0.5h,解吸次数为2次,所得香菇核苷类成分富集产物得率为8.39%,总含量为21.16%。以此方法对14种食药用菌中的核苷类成分进行制备,所得产物得率在4.96%-10.70%之间,已知核苷类成分总含量为7.72%~25.95%;指纹图谱分析富集产物筛选得到10个未知特征峰(Peak1-10)。(3)对不同食药用菌核苷类成分富集产物抑制肿瘤细胞增殖活性进行评价,结果显示金针菇、白玉菇、香菇、姬松茸、白肉灵芝、蛹虫草、鸡腿菇、灰树花、榆黄菇、滑子菇、羊肚菌核苷类成分富集产物的IC50值分别为54.807μg/mL、71.796μg/mL、83.060μg/mL、106.639μg/mL、141.781μg/mL、202.474μg/mL、240.651μg/mL、390.358μg/mL、462.025μg/mL、587.900μg/mL、821.688μg/mL;元蘑、杏鲍菇、茶树菇核苷类富集产物抑制K562细胞增殖活性较弱。综合比较富集产物核苷类成分总含量和指纹图谱特征发现,其抑制肿瘤细胞增殖活性与核苷成分含量和种类均存在一定的相关性,腺苷、尿苷和鸟苷作为食药用菌中最主要、占比最大的核苷组分对其抗肿瘤活性并无显著影响。
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