组蛋白H4乙酰转移酶Nu A4(nucleosome acetyltransferase of H4)是一个多亚基复合物,它的平台蛋白在构巢曲霉中命名为Eaf A,参与细胞正常的有丝分裂进程并响应DNA破坏试剂。条件致病菌白色念珠菌中Eaf1 K173位点的乙酰化状态决定了酵母态与菌丝态的形态转变,曲霉病的致病机理和白色念珠菌很相似,它以孢子形态侵染人类组织和器官,然后萌发成菌丝产生毒性。所以在条件致病菌构巢曲霉中,研究Eaf A Q576位点及这个蛋白对菌丝生长发育的影响,对于曲霉致病性具有非常重要的意义。首先,我们构建了Eaf A-Flag菌株,计划通过质谱法检测构巢曲霉菌丝中Eaf A Q576位点酰胺基团是否被水解,但是盐提法无法将Eaf A-Flag融合蛋白提取出来。接下来计划构建eaf A基因敲除菌株并将eaf A Q576R/K位点突变的片段导入该菌株中,观察其对构巢曲霉菌丝发育和极性生长的影响。但是通过实验发现eaf A是必需基因,无法构建敲除菌株。不过这个实验结果也从侧面进一步证明了Eaf A在构巢曲霉中必定有着更重要的新功能,可能这个蛋白直接影响菌丝的生长发育。通过构建酒精启动子控制的条件菌株,发现当Eaf A低表达时,抑制菌丝发育并引发极性丢失。那么Eaf A影响菌丝发育和极性生长的调控机制是什么呢?通过检测组蛋白H4第5位和第12位赖氨酸的乙酰化水平和Nu A4复合物蛋白亚基的转录水平,并构建H4K5R和H4K12R双点突变菌株,简洁明了地展现了这个调控过程:Eaf A低表达时,Nu A4复合物中多数亚基的表达量下降,使Nu A4复合物不能正常发挥乙酰转移酶功能,影响了组蛋白特异位点的乙酰化水平,最终影响了与菌丝发育和极性生长相关基因的转录和表达。这些结果对于未来研究真菌菌丝致病机理有重要的意义。