脐橙果皮的光泽度是决定脐橙外观品质的一项重要指标,果皮极富光泽的“赣脐3号”的成功选育为研究柑橘表皮蜡质合成和运输的分子机理提供了一个很好的材料。本研究以纽荷尔脐橙和“赣脐3号”脐橙为材料,克隆出脐橙蜡质合成相关转录因子SHINE家族的3个基因,分别为CsSHN1,CsSHN2,CsSHN3;同时,通过实时定量PCR的方法检测CsSHNs基因在纽荷尔脐橙和“赣脐3号”脐橙中的时空表达差异;最后,通过转基因技术验证CsSHNs基因在脐橙表皮蜡质合成过程中所起的作用,以期为进一步利用基因工程技术改良脐橙外观品质提供新的基因资源和理论依据。研究结果如下:（1）从脐橙中克隆出SHINE家族的3个基因,分别命名为CsSHN1,CsSHN2,CsSHN3。通过对3个基因的cDNA序列及蛋白序列进行生物信息学分析,可知CsSHN1基因cDNA序列全长608 bp,包含588bp的开放阅读框,编码195个氨基酸。CsSHN2基因cDNA序列全长619 bp,包含609bp的开放阅读框,编码202个氨基酸。CsSHN3基因cDNA序列全长664 bp,包含654bp的开放阅读框,编码217个氨基酸。3个蛋白的N端都包含多段保守的氨基酸序列,含有一个AP₂结构域。（2）对3个基因在纽荷尔脐橙和“赣脐3号”脐橙中的时空表达量分析可知:3个基因在纽荷尔脐橙和“赣脐3号”脐橙的茎、叶、花、果皮中均有表达,其中在花中的表达量最高,其次为叶、果皮和茎;花器官中,3个基因在雌蕊中表达最高,在雄蕊、花瓣和花萼中表达相对较低;在纽荷尔脐橙和“赣脐3号”脐橙花和果实发育过程中,3个基因的表达量不断增加;在所检测的脐橙各个组织和发育时期中,3个基因在“赣脐3号”脐橙中的表达量均低于纽荷尔脐橙。（3）构建了3个基因的超量表达载体,并使用农杆菌介导的花序浸染法转入拟南芥中,成功获得3个基因的转基因植株。对转基因植株的表型进行分析,TB染色实验及叶绿素渗透率实验结果显示相对于野生型拟南芥植株,转基因植株叶片的渗透率降低;扫描电镜结果显示,转基因植株茎和叶表面的蜡质晶体数量明显增加,且蜡质结构发生一定的改变。实时定量PCR试验结果表明,在超量表达3个脐橙SHINE家族基因的转基因拟南芥中,SHINE家族转录因子调控的下游基因AtCER1、AtCER3和AtKCS1表达量增加。综上所述,脐橙CsSHNs的超表达会导致转基因拟南芥中其下游调控蜡质合成基因的上调表达,从而引起茎和叶表皮蜡质晶体数量增加,晶体结构发生改变,说明CsSHNs基因具有调控脐橙蜡质合成的作用。