【摘 要】
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在转基因乳腺生物反应器的制作中,由于目的基因在与宿主基因组整合中存在位置效应和基因串联效应,导致目的蛋白基因表达水平低、不稳定.随着基因打靶技术和动物克隆技术技术
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在转基因乳腺生物反应器的制作中,由于目的基因在与宿主基因组整合中存在位置效应和基因串联效应,导致目的蛋白基因表达水平低、不稳定.随着基因打靶技术和动物克隆技术技术的发展,外源基因在高等哺乳动物基因组中的定点整合成为了可能.为此,该研究对人血小板生成素乳腺表达打靶载体的构建进行了研究.以绵羊β-酪蛋白基因的5调控区为启动子,人血小板生成素基因为目的基因,奶牛αs1-酪蛋白基因为靶向基因.通过长片段PCR从高产奶牛的基因组中获得了打靶所需的长、短同源臂序列,长度分别为6.0kb和1.8kb,位于αs1-酪蛋白基因的5上游区到第三内含子和十二到十四内含子;从绵羊全血基因组克隆得到了绵羊的β-酪蛋白基因启动子区到第二内含子区4.1kb的5调控序列;利用同对引物克隆得到了水牛的同基因序列;从广西当地一婴儿脐血基因组中通过获得了人血小板生成素基因,位于第1内含子到终止子后部分的序列,长达5.5kb.把它们分别克隆到pMD-18T载体上,经酶切分析、部分序列测定和同源分析确认克隆得到了所需的基因片段,可以用于基因打靶载体构建.
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