论文部分内容阅读
灰霉菌是一种广谱型病原真菌，可以侵染许多作物，给人类造成了巨大的经济损失。反式-2-己烯醛是一种重要的植物挥发性化合物，具有很强的抑菌活性。本文通过灰霉菌转录组学，研究反式-2-己烯醛对灰霉菌的影响机制，并利用基因敲除技术研究硫同化通路影响反式-2-己烯醛对灰霉菌抑菌作用，旨在探究反式-2-己烯醛的抑菌机理以及更好的利用反式-2-己烯醛作为果蔬抑菌剂提供应用理论基础。主要研究结果如下：
1、反式-2-己烯醛处理能够抑制灰霉菌孢子萌发和菌丝生长，最低抑菌浓度（MIC）为5.24μM，最低杀菌浓度（MFC）为1048μM。反式-2-己烯醛MFC浓度处理30min会引起灰霉菌谷胱甘肽代谢相关基因表达上调，尤其是Bcglr1（fold changes值13.9）表达显著上调，还能影响灰霉菌硫代谢途径相关的基因，特别是硫同化途径的基因Bcmet3（22.6倍）、Bcmet16（12.3倍）、Bcmet10（2.47倍）表达量显著上调。
2、利用原生质体转化法，利用抗性筛选、PCR验证，获得了硫同化基因Bcmet3和Bcmet16缺失突变体△Bcmet3和△Bcmet16以及回补菌株pBcmet3和pBcmet16。敲除菌株的孢子萌发率显著下降，回补菌株无差异。灰霉菌对于硫的利用与抵抗反式-2-己烯醛密切相关，培养基中无硫源或者无法利用硫源（敲除硫同化基因）时，对反式-2-己烯醛抗性下降。反式-2-己烯醛处理会导致灰霉菌ROS分子积累、蛋白质羰基化水平提高以及谷胱甘肽含量升高，同时与Bcmet3和Bcmet16基因相互关联。
3、反式-2-己烯醛熏蒸对于贮藏期间番茄和草莓采后灰霉菌的生长有抑制作用。敲除菌株△Bcmet3、△Bcmet16对番茄及草莓的致病性显著低于野生型灰霉菌，且在反式-2-己烯醛熏蒸下敲除菌株菌斑均更低，耐受能力明显下降。硫代谢有助于灰霉菌抗逆性，2g/L的硫酸钾浸泡果梗能够显著提高番茄以及草莓果实的硫酸根含量，硫酸钾处理草莓后菌斑直径高于对照组，硫酸根含量的升高会有助于灰霉菌的侵染和抵抗反式-2-己烯醛。
1、反式-2-己烯醛处理能够抑制灰霉菌孢子萌发和菌丝生长，最低抑菌浓度（MIC）为5.24μM，最低杀菌浓度（MFC）为1048μM。反式-2-己烯醛MFC浓度处理30min会引起灰霉菌谷胱甘肽代谢相关基因表达上调，尤其是Bcglr1（fold changes值13.9）表达显著上调，还能影响灰霉菌硫代谢途径相关的基因，特别是硫同化途径的基因Bcmet3（22.6倍）、Bcmet16（12.3倍）、Bcmet10（2.47倍）表达量显著上调。
2、利用原生质体转化法，利用抗性筛选、PCR验证，获得了硫同化基因Bcmet3和Bcmet16缺失突变体△Bcmet3和△Bcmet16以及回补菌株pBcmet3和pBcmet16。敲除菌株的孢子萌发率显著下降，回补菌株无差异。灰霉菌对于硫的利用与抵抗反式-2-己烯醛密切相关，培养基中无硫源或者无法利用硫源（敲除硫同化基因）时，对反式-2-己烯醛抗性下降。反式-2-己烯醛处理会导致灰霉菌ROS分子积累、蛋白质羰基化水平提高以及谷胱甘肽含量升高，同时与Bcmet3和Bcmet16基因相互关联。
3、反式-2-己烯醛熏蒸对于贮藏期间番茄和草莓采后灰霉菌的生长有抑制作用。敲除菌株△Bcmet3、△Bcmet16对番茄及草莓的致病性显著低于野生型灰霉菌，且在反式-2-己烯醛熏蒸下敲除菌株菌斑均更低，耐受能力明显下降。硫代谢有助于灰霉菌抗逆性，2g/L的硫酸钾浸泡果梗能够显著提高番茄以及草莓果实的硫酸根含量，硫酸钾处理草莓后菌斑直径高于对照组，硫酸根含量的升高会有助于灰霉菌的侵染和抵抗反式-2-己烯醛。