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阿留申病毒归类为细小病毒科(Parvoviridae)阿留申病毒属(Amdovirus)的成员,目前有6个病毒种,包括水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)、灰狐阿留申病毒(Gray fox amdoparvovirus,GFAV)、貉蓝狐阿留申病毒(Raccoon dog and arctic fox amdoparvovirus,RFAV)、臭鼬阿留申病毒(Skunk amdoparvovirus,SKAV)、赤狐粪阿留申病毒(Red fox fecal amdovirus,RFFAV)和小熊猫阿留申病毒(red panda amdoparvovirus,RpAPV)。为建立通用于多种阿留申病毒的检测和定量方法,本研究以6种阿留申病毒的VP2基因为参考序列,在其保守区设计特异性引物和探针,采用直接碱裂解法获得病毒DNA,建立TaqMan qPCR方法。结果表明,AMDV、RFAV检测极限分别为4.06×10~1 copies/μl、2.93×10~1 copies/μl,变异系数小于2%。在74份临床样品中,TaqMan qPCR检测阳性率为62.2%(46/74),SYBR Green I qPCR检测阳性率仅为40.5%(30/74)。除GFAV外,本研究建立的TaqMan qPCR可用于多种阿留申病毒的检测和定量。为研究毛皮动物阿留申病毒分子特征。采集3个不同地区125份乌苏里貉血液样品、80份蓝狐血液样品、45份银黑狐血液样品、70份紫貂粪便样品进行阿留申病毒PCR检测,阳性率分别为62.4%(78/125)、1.3%(1/80)、0(0/45)、0(0/70)。选择部分阳性样品测序,获得貉阿留申病毒近全长基因组4 327 bp,蓝狐阿留申病毒VP2基因组710 bp。序列分析表明蓝狐阿留申病毒与RFAV-XQ-JLR株VP2基因核苷酸相似性为97.45%。貉阿留申病毒与RFAV参考序列分析显示VP2和NS1核苷酸、氨基酸序列相似性均大于90.0%,表明目前国内流行的貉、蓝狐阿留申病毒可能是RFAV突变株。RFAV与AMDV、SKAV、RpAPV、GFAV参考序列分析显示,VP2核苷酸相似性为75.7%?90.3%,氨基酸相性为77.0%?91.0%;NS1核苷酸相似性为67.8%?83.6%,氨基酸相似性为62.3%?76.5%,小于80.0%。基于VP2、NS1氨基酸序列、VP2高变区核苷酸序列构建进化树显示,已发布的和新测序的貉、蓝狐阿留申病毒形成一个RFAV分枝,与阿留申病毒属的AMDV、SKAV、RpAPV、GFAV各处于不同的分枝。以NS1氨基酸相似性小于85.0%作为细小病毒亚科毒种的划分标准,同源性和进化分析均显示RFAV与AMDV、SKAV、RpAPV、GFAV属于不同阿留申病毒种。阿留申病毒VP2高变区分子流调显示,在自然感染状态下,RFAV仅感染养殖的貉、蓝狐,AMDV仅感染养殖水貂,在国内的貂狐貉混养的养殖场或地区中未发现两种病毒交叉感染。参考AMDV的主要功能区对RFAV分析显示在复制、毒力、宿主等功能域的关键氨基酸突变一致或突变为理化性质相似的氨基酸,说明阿留申病毒可能通过突变某些关键功能域以感染不同宿主。为研究RFAV的VP2和NS1蛋白的抗原表位特征,筛选阿留申病毒属较保守的B、T细胞抗原表位。对本研究获得的6株RFAV的VP2和NS1蛋白进行生物信息学预测和分析显示,在阿留申病毒属内,VP2蛋白有3个保守的B细胞抗原表位,3个保守的T细胞表位,8个保守的翻译后修饰位点;NS1蛋白有1个保守的B细胞抗原表位,2个保守的T细胞抗原表位和7个保守的翻译后修饰位点。这些表位可能是RFAV的优势抗原表位。