染色质重塑蛋白INO80在猪胚胎附植前发育期间的表达及功能

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kitty1973
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猪既是十分重要的经济动物,也是理想的模式动物。着床前胚胎死亡是导致猪繁殖力低的主要原因之一。因此,研究猪早期胚胎发育机制,对畜牧学、医学和基础研究均具有重要意义。染色质重塑蛋白INO80通过调控基因组稳定性和基因表达影响细胞生长与发育。目前,未见INO80是否参与调控大家畜猪早期胚胎发育的报道。本文旨在以猪主要器官和附植前胚胎为试验材料,揭示INO80在猪生长发育过程中的表达模式与功能。对人、小鼠、大鼠和猪INO80、INO80B、INO80C、INO80D、INO80E进行生物信息学分析,发现INO80在猪、人、小鼠和大鼠中高度保守,氨基酸序列上同源性分别到达97.51%、96.42%和96.42%;系统进化树显示进化上猪INO80与人INO80的亲缘关系非常接近;使用qPCR、WB和IF方法研究猪INO80的时空表达谱,发现在猪主要器官和PA胚胎中,转录层面和蛋白层面都有INO80的表达;利用RNAi的方法在未影响到IN080几个亚基表达的基础上特异性的敲低了猪PA胚胎中INO80的表达,在8细胞、桑椹胚和5d-囊胚中的敲低效率分别为47.85%、80.68%和86.75%,在5d囊胚中INO80的蛋白敲低效率为69.03%;分别对INO80敲低后的猪PA和IVF胚胎进行表型观察,发现注射SiINO80混合片段组相对于Uninjected和Sham-water两个对照组,囊胚率均显著降低;在5d囊胚中伴随着INO80的敲低,Υ-H2A.X的蛋白表达未受显著影响,而SOX 2的蛋白表达显著降低了48.77%。总之,INO80广泛参与了猪主要器官和附植前胚胎的生长发育;可能通过多能性转录因子SOX2来维持囊胚的多能性以及细胞谱系的分离,进而影响猪囊胚的形成。
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