【摘 要】
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通过RT-PCR扩增获得莱茵衣藻E3泛素连接酶基因CrCUL1的ORF编码区,将其克隆至含有GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1.获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).对阳性克隆进行IPTG诱导表达.实验获得该融合蛋白的最佳诱导条件为IPTG浓度1mmol·L-1；诱导时间2h；诱导温度30℃.SDS-PAGE电泳显示该重组蛋白在上清中大量表达,分子量约112kDa,与预期的蛋白质大
【机 构】
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中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口,571101
【出 处】
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中国热带作物学会遗传育种专业委员会2013年度学术研讨会
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通过RT-PCR扩增获得莱茵衣藻E3泛素连接酶基因CrCUL1的ORF编码区,将其克隆至含有GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1.获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).对阳性克隆进行IPTG诱导表达.实验获得该融合蛋白的最佳诱导条件为IPTG浓度1mmol·L-1；诱导时间2h；诱导温度30℃.SDS-PAGE电泳显示该重组蛋白在上清中大量表达,分子量约112kDa,与预期的蛋白质大小一致.采用GST-resin亲和柱纯化获得高纯度和高浓度的CrCUL1融合蛋白,可以用于进一步泛素化分析等实验.
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