【摘 要】
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为了探究组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶的酶学性质,克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)异源表达了斑马鱼来源的组蛋白赖氨酸脱甲基酶1(histone lysine specific demethylase 1,Lsd1)和咖啡来源的组蛋白赖氨酸脱甲基酶(jumonji C,Jmjc)基因,进一步优化了发酵产酶条件.利用镍柱亲和层析纯化表达产物,考察了重组酶的酶学性质.结果表明,成功构建2个来源的重组大肠杆菌菌株BL21(DE3)/pET28a-lsD1和BL21(DE3)/pET28a-jmjC,在发酵温度25℃
【机 构】
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粮食发酵工艺与技术国家工程实验室(江南大学),江苏 无锡,214122
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为了探究组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶的酶学性质,克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)异源表达了斑马鱼来源的组蛋白赖氨酸脱甲基酶1(histone lysine specific demethylase 1,Lsd1)和咖啡来源的组蛋白赖氨酸脱甲基酶(jumonji C,Jmjc)基因,进一步优化了发酵产酶条件.利用镍柱亲和层析纯化表达产物,考察了重组酶的酶学性质.结果表明,成功构建2个来源的重组大肠杆菌菌株BL21(DE3)/pET28a-lsD1和BL21(DE3)/pET28a-jmjC,在发酵温度25℃、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度0.1 mmol/L条件下获得了可溶性目的蛋白,并在咪唑浓度分别为100、200 mmol/L的条件下纯化洗脱得到纯酶.纯化的Lsd1、Jmjc最适反应温度分别为35、20℃,最适反应pH分别为7.0、8.0,Lsd1的温度稳定性相对较高,Jmjc的酸碱耐受力更强;在金属离子影响方面,Mn2+对Lsd1和Jmjc的酶活力都有明显的促进作用,Co2+、Mg2+、Ca2+、Zn2+、Ni2+对两者有不同程度的抑制作用;动力学研究发现,需要较长时间才能与底物反应,Lsd1和Jmjc的催化效率较低,kcat/Km分别为8.23×10-6、1.06×10-5 L/(mol·s).研究结果为组蛋白赖氨酸脱甲基酶在非组蛋白的N—CH3类化合物降解和体外抑制剂中的研究提供了基础.
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枯草芽孢杆菌被认为是安全的菌株,其作为底盘细胞在发酵领域具有独特的优势.然而,与使用最广泛的原核生物宿主大肠杆菌和真核生物宿主酿酒酵母相比,枯草芽孢杆菌由于缺乏基因调控元件在生物技术领域受到限制.该研究通过与bsrG/SR4的比较,成功构建了1套以I型毒素-抗毒素系统bsrE/SR5为基础的基于小RNA的新型调控系统,抑制效率达到88.8％.该系统的建立为枯草芽孢杆菌基因调控提供了新的转录后水平的调控工具.其次,我们对SR5进行了截短表达.仅保留终止子序列的SR5截短突变体也能保持较高的抑制效率(83.8
利用高通量测序技术对四川黄酒麦曲发酵过程中细菌和真菌群落动态变化规律进行解析.研究表明,细菌类的葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠杆菌属(Enterobacter)、Kosakonia为发酵前期的主要菌属,在发酵第5天(顶温)时,群落物种最为丰富;真菌类的曲霉属(Aspergillus)在整个发酵过程中一直是绝对优势菌属,随着发酵的进行,其丰度略有下降.在对黄酒麦曲理化指标的检测中发现,在麦曲发酵结束后,水分含量下降,糖化力、液化力、还原糖含量和酸度均上升.麦曲理化指标与微生物种群结构具有一定
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