【摘 要】
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目的 建立基于微流控芯片平台的中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）一体化自动检测方法。方法 制备MERS-CoV假病毒颗粒阳性参考品，设计针对病毒ORF1b基因区的引物和探针，制备基于实时荧光RT-PCR全流程的一体化集成微流控芯片，实现含样品裂解、核酸提取、核酸扩增和荧光检测的全自动检测。利用芯片内预包埋的内参基因对芯片系统性能进行监测，利用MERS-CoV假病毒阳性参考品对方法的灵敏度、
【机 构】
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海关总署(北京)国际旅行卫生保健中心
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2019YFF0302501;2021YFC2401000）；
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目的 建立基于微流控芯片平台的中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）一体化自动检测方法。方法 制备MERS-CoV假病毒颗粒阳性参考品，设计针对病毒ORF1b基因区的引物和探针，制备基于实时荧光RT-PCR全流程的一体化集成微流控芯片，实现含样品裂解、核酸提取、核酸扩增和荧光检测的全自动检测。利用芯片内预包埋的内参基因对芯片系统性能进行监测，利用MERS-CoV假病毒阳性参考品对方法的灵敏度、特异性和重复性检测评价。结果 微流控芯片中内参基因可以稳定扩增。自动化方法可检测原始样本中100拷贝（copies）的MERSCoV假病毒，优于常规实时荧光RT-PCR（500 copies检出限）；100 copies假病毒重复测试6次CT值为（39.80±0.53），变异系数为1.34%。用自动化方法检测其他冠状病毒和人源基因均为阴性。结论 建立的MERS-CoV微流控芯片一体化自动检测方法具有良好的稳定性、灵敏度和特异性，操作简便、快速，不受实验场地限制，可用于中东呼吸综合征现场即时检测。
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