利用免疫磁珠技术富集肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌

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沙门氏菌是引起人类食物中毒的主要病原菌之一,对人和动物均有致病性。在世界范围内,沙门氏菌污染肉类和蛋类引起的食物中毒仍占有很高的比例。金黄色葡萄球菌能引起多组织的感染,如引起菌血症、心内膜炎和肺炎等,由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒其危害程度仅次于沙门氏菌属,是主要的食品污染细菌。免疫磁珠是指包被有相关免疫配基(-NH2,-COOH等)的磁性微粒,利用抗原抗体反应的特异性地从混合液中分离靶物质,具有高度专一性、操作简单、不需要昂贵的仪器设备等特点。食品中沙门氏菌的检验主要用分离培养方法,由于污染量少,常规检验时必须进行增菌培养以提高检出率,因而耗时较长,检出率较低,难以在现场进行即时的快速检验。本研究应用免疫磁性分离技术及抗体制备技术,希望能从污染菌很少的样品中快速富集细菌,用集菌的方法代替增菌培养,以提高沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的检出率,缩短检验时间,为市场检疫提供更为便捷的快速检验方法。1.肠炎沙门氏菌高免血清的制备将肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis, SE)免疫原与弗氏佐剂乳化后免疫家兔和鸡,得到抗肠炎沙门氏菌的高免血清。分别经饱和硫酸铵粗提、G-200过柱纯化和辛酸-硫酸铵盐析法纯化,获得了兔抗SE和鸡抗SE的多克隆纯化抗体IgG,为应用免疫磁珠技术富集肠炎沙门氏菌方法的建立奠定了基础。2.免疫磁珠技术富集肠炎沙门氏菌和免疫磁珠的保存利用化学共沉淀的方法合成了磁性微粒,粒径约为30~100 nm,对其表面进行硅烷化和醛基化修饰。使用抗SE的多克隆抗体包被修饰后的磁性微粒,确定了磁珠与多克隆抗体的偶联条件。试验结果表明:使用200μL免疫磁珠与菌液作用30 min即可从样品中富集到肠炎沙门氏菌,灵敏度高达3cfu/mL。该技术要优于传统的细菌分离培养方法。分别采取冻干法和冷藏法直接保存免疫磁珠,在不同的条件下保存一定时间后进行吸附试验,结果表明冻干法保存的磁珠吸附能力降低,故不选用冻干法保存磁珠。在直接冷藏保存组中,加保护剂的免疫磁珠吸附细菌的能力优于未加保护剂的免疫磁珠,确定了0.1‰硫柳汞与1%蔗糖混合液作为免疫磁珠的保存液。3.免疫磁珠技术富集金黄色葡萄球菌建立了免疫磁珠技术富集金黄色葡萄球菌的方法。试验结果表明,用100μL免疫磁珠与菌液作用15min即可从菌液中富集到金黄色葡萄球菌,敏感性高达5cfu/mL。试图将免疫磁珠技术与ELISA显色技术相结合的IMS-ELISA方法的尝试未获成功,有待今后更进一步研究。
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