论文部分内容阅读
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有生长速度快，代谢产物丰富，可利用开发价值高以及食用安全等显著优点，广泛应用于农业生物防治。对枯草芽孢杆菌进行分离、鉴定以获得更多具有应用价值的菌株具有重要意义。采用16S rDNA序列分析法对本实验室采用传统方法鉴定的枯草芽孢杆菌菌株B3、38、49、85从进行鉴定。结果表明：测定的芽孢杆菌菌株与已报道的枯草芽孢杆菌属具有高度的同源性，其中B3、38、49、85菌株的16S rDNA与模式菌株168的同源性分别为99.4％、99.5％、93.8％和99.4％。B3的16S rDNA序列已经登录到了GenBank上，登录号为：EF492885。应用DNAstar软件对这些序列进行分析，构建了系统发育树，B3、38、49、85与枯草芽孢杆菌模式菌株168聚在一起，说明它们的亲缘关系较近。基质协助激光解吸附／电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption／ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)技术是近年来发展起来的新的质谱离子化技术，通过对细菌成分的分析，来鉴定细菌。用MALDI-TOF-MS对本实验室分离保存的枯草芽孢杆菌菌株B2、B3、43、49、55、72、85、90进行分析，以来自美国菌种保藏中心菌株168、ATCC6633、ATCC13952、ATCC21332，及柏林理工大学Dr．Joahim Vater惠赠的菌株A1／3、b213、C1为标准菌株。分析结果表明，每个菌株一般出现3～4条谱带，其中m／z为379、493、618、714、843和969是经常和比较稳定出现的特征性信号谱带。提示：这些谱带可能代表枯草芽孢杆菌产生的次生代谢物质。枯草芽孢杆菌防治植物病害的主要生物活性物质是脂肽化合物。本试验用本实验室已经分离纯化的枯草芽孢杆菌脂肽化合物，包括surfactin、bacillomycinD和fengycin，进行实验室抑菌试验和防治黄瓜霜霉病及烟草花叶病毒病试验。试验结果表明，20μg／mL bacillomycinD和5μg／mL fengycin处理的稻瘟病菌分生孢子顶端芽管产生球形膨大；10μg／mL Surfactin处理的孢子球形较小，芽管主要呈根结状突起。20μg／mL bacillomycinD、5μg／mL fengycin、10μg／mL surfactin对小麦赤霉病菌分生孢子的抑制作用不如对稻瘟病菌分生孢子明显，没有出现球形膨大的现象。用surfactin防治烟草花叶病毒(TMV)，以喷施surfactin 1 d后接种防治效果最好，10 mg／L surfactin对TMV的枯斑抑制率就超过了50％，60 mg／L surfactin处理的枯斑抑制率达95.65％。接种15 d，对照植株全部死亡，而喷施surfactin的植株仅接种的叶片部分枯死，植株仍然可以继续生长。未经分离纯化的100 mg／L脂肽化合物对黄瓜霜霉病的防治效果与80 g／667 m~2代森锰锌相近，而200 mg／L脂肽化合物的防效好于代森锰锌，第1次喷药后防效达72.36％，第2次喷药后防效达83.64％。因此，脂肽化合物可以作为生防药用于植物病害防治。