第一部分小鼠单倍体精子细胞显微注射方法学研究目的：探讨改良持卵针的显微操作系统在小鼠精子细胞体外授精中的应用价值。方法：通过反复锻烧将常规持卵针制作成喇叭形开口状，制成改良持卵针，辅以独特的显微注射操作手法，对小鼠生精细胞体外培养所获单倍体圆形精子进行卵胞浆内显微注射（ROSI），计算ROSI后30min昆明小白鼠卵母细胞的存活数和存活率，并与常规窄口持卵针行ROSI后的卵母细胞存活率进行比较。结果：分别采用常规和改良后的持卵针进行小鼠ROSI，每种方法各注射320个卵母细胞。改良持卵针组ROSI后30min的卵母细胞存活率显著高于未改进持卵针组（P<0.05）。结论：改良持卵针制备简单，易于操作，ROSI后卵母细胞存活率高，且不需依赖piezo系统，在小鼠单倍体精子细胞体外受精的研究中有较高的临床应用价值。第二部分化学激活在小鼠圆形精子体外受精中的应用目的：通过对生精细胞体外培养所获圆形精子显微注射后的小鼠卵母细胞进行单一和联合化学激活，寻找小鼠圆形精子体外受精的最佳激活方案。方法：选取乙醇（ethanol，EH）、钙离子载体A23187(calcium ionophore A23187，CIA)、离子霉素（ionomycin，Ion）、氯化锶（strontium chloride，SrCl2）、放线菌酮（cycloheximide，CHX）及6-二甲基苯胺嘌呤(6-dimethylaminopurine，6-DMAP)作为外源性化学激活剂，采用不同浓度的单一化学激活剂对ROSI后的卵母细胞进行不同作用时间激活，观察其受精率、卵裂率和桑囊胚形成率。根据激活不同的途径，联合两种最佳激活浓度和激活时间的单一激活剂对ROSI后的卵母细胞进行联合激活，比较不同联合方案对卵母细胞的激活效果；并以成年小鼠睾丸内圆形精子ROSI作为对照，比较体内精子细胞和体外培养精子细胞的受精能力及胚胎发育潜能。结果：（1）单一激活时，各激活剂的最佳方案分别为①乙醇：7%、6min；②CIA：5μmol/L、5min；③Ion：5μmol/L、5min；④6-DMAP：2mmol/L、2h；⑤SrCl2：10mmol/L、1.5h；⑥CHX：10μg/mL、1.5h，其中10mmol/L SrCl2作用1.5h激活效果最佳，显著优于CHX方案，但与其它各组无显著性差异；（2）联合激活时，乙醇+6-二甲基苯胺嘌呤组桑囊胚率（29.63%）显著高于其它各组，以及除SrCl2以外所有单一激活方案（P<0.05），为最佳联合激活方案；（3）对成年小鼠睾丸中圆形精子ROSI后的卵母细胞进行乙醇+6-二甲基苯胺嘌呤激活后，其正常受精率、卵裂率及桑囊胚率与体外培养所获圆形精子间均无显著性差异。结论：单一激活方案中10mmol/L SrCl2单独作用1.5h，联合方案中7%EH作用6min+2mmol/L6-DMAP作用2h对体外培养所获圆形精子ROSI后的卵母细胞激活效果最佳；体外培养所获圆形精子ROSI后受精率、胚胎发育潜能与成年小鼠睾丸内圆形精子间无显著性差异。