【摘 要】
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烟草根黑腐病是危害广泛的土传真菌病害,目前主要是化学防治,然而化学药剂的长期高剂量使用容易导致“3R”问题,因此生物防治日益受到重视。根际促生菌不仅能促进植物生长,又能抑制病原菌,具有广阔的应用前景。芽孢杆菌作为根际促生菌的一员,能产生抗逆性强的芽孢且产生的抑菌活性物质丰富,具有独特的生防优势。本文旨在丰富烟草根黑腐病根际促生菌的菌种资源,为生防菌的田间应用提供理论依据,以期将生防菌更好的应用于实
【基金项目】
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四川省微生物菌剂研究重点科技项目基金（编号:SCYC202009）； 陕西省绿色防控重点项目基金（KJ-2018-01）； 汉中市常见病害防治研究重点项目基金（2019610700270095）；
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烟草根黑腐病是危害广泛的土传真菌病害,目前主要是化学防治,然而化学药剂的长期高剂量使用容易导致“3R”问题,因此生物防治日益受到重视。根际促生菌不仅能促进植物生长,又能抑制病原菌,具有广阔的应用前景。芽孢杆菌作为根际促生菌的一员,能产生抗逆性强的芽孢且产生的抑菌活性物质丰富,具有独特的生防优势。本文旨在丰富烟草根黑腐病根际促生菌的菌种资源,为生防菌的田间应用提供理论依据,以期将生防菌更好的应用于实际生产。主要内容如下:1.从四川广元和陕西汉中等地的烟草发病田中采集73份烟草根际土壤,分离到398株菌株。其中一株菌株LY79对烟草根黑腐病菌的抑菌效果最强,抑菌带宽为12.4mm,无菌滤液（不含菌体而含有菌株代谢物质的发酵液）抑制率为81.5%,且菌株LY79使烟草根黑腐病菌的菌丝分枝增多、膨大、畸形。平板对峙实验证明菌株LY79具有抑菌广谱性,对多种病原菌的抑制效果较强。联合菌株形态、生理生化、16S rRNA和持家基因rpoB序列的系统发育分析将菌株LY79鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。2.为提高菌株LY79发酵液中的菌量和抑菌活性,通过单因素试验,综合考虑菌量和抑菌率的前提下,对菌株LY79进行发酵优化。得出菌株LY79发酵的最适碳源、氮源、无机盐分别是葡萄糖、牛肉膏、KH2PO4,最适pH=7,最适温度30℃,最适接种量1.5%,最适装液量75 mL/250 mL。优化后菌株LY79发酵液菌量提高了27.2%,其无菌滤液对烟草根黑腐病菌抑制率提高了38.5%。此外,菌株LY79的发酵产物在pH=2和pH=13处理12 h、紫外处理24 h、120℃处理1 h后仍存在抑菌活性,说明菌株LY79的抑菌物质耐酸碱、耐紫外和耐高温,抑菌活性稳定,对不良环境的抗逆性强。3.盆栽试验结果表明菌株LY79对烟草的促生效果较好,1×10~8CFU/mL浓度的菌株LY79发酵液灌根处理烟草,与对照相比,烟草株高增加了34.7%,茎粗增加了37.9%,整株鲜重增加了117.9%,整株干重增加了103.8%,根鲜重增加了97.7%,根干重增加了72.6%。另外,实验证明菌株LY79具有固氮和溶磷能力,解钾能力不明显。4.生防菌能发挥促生防病效果的前提是能在烟草上稳定定殖,本文采用抗生素标记法检测菌株LY79R对烟草的定殖规律。结果发现菌株LY79R在烟草根际的定殖量呈先下降后少量上升再缓慢下降的趋势,第40天仍能检测到1.34×10~6CFU/g的标记菌株。菌株在烟草根系、茎和叶的定殖量呈先上升后下降的趋势,第40天的定殖量仍均有10~4CFU/g,说明菌株LY79R易在烟草上定殖。5.检测菌株LY79对烟草根黑腐病的盆栽防效,1×10~9CFU/mL浓度的菌株LY79发酵液对烟草根黑腐病的防治效果达71.5%,略低于70%甲基托布津78.5%。70%甲基托布津与菌株LY79按1:1复配对根黑腐病防效达82.1%,显著高于各自单剂,具有增效作用,但菌株与多菌灵复配对根黑腐病的防治效果与单剂无明显差异。在实际生产应用中,考虑将菌株LY79与杀菌剂复配使用,以期结合二者的优点又弥补各自的缺陷,减少化学农药的使用,减少农药残留,实现农业绿色发展。
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