【摘 要】
：
黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1,AFM1）和赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）是牛奶中常见的真菌毒素,在体内不断蓄积会损害肝肾功能,严重危害人和动物的健康,且两者在人体内共存时会增加联合毒性作用的潜在风险。目前市场上的真菌毒素快速检测方法主要是操作复杂的酶联免疫吸附法和灵敏度较低的胶体金免疫层析法,且多数方法仅针对单一毒素,而多组分快速检测技术的研究也只是基于胶体金免疫层析
论文部分内容阅读
黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1,AFM1）和赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）是牛奶中常见的真菌毒素,在体内不断蓄积会损害肝肾功能,严重危害人和动物的健康,且两者在人体内共存时会增加联合毒性作用的潜在风险。目前市场上的真菌毒素快速检测方法主要是操作复杂的酶联免疫吸附法和灵敏度较低的胶体金免疫层析法,且多数方法仅针对单一毒素,而多组分快速检测技术的研究也只是基于胶体金免疫层析技术,难以实现真菌毒素混合污染的同步快速定量检测。因此,建立混合真菌毒素的快速检测技术对保证乳品安全和消费者健康具有重要意义和应用价值。本课题基于免疫层析原理,以AFM1和OTA为主要研究对象,将荧光微球作为示踪剂,实现了AFM1的单独检测以及AFM1-OTA的双联快速检测,提高了真菌毒素的检测效率和灵敏度,为乳品中混合真菌毒素污染同步定量检测提供了新思路,主要研究内容及结果如下:（1）基于免疫学竞争原理,构建AFM1荧光定量试纸条。在硝酸纤维素膜上分别喷涂完全抗原、羊抗鼠Ig G抗体,制备荧光探针并表征,建立AFM1时间分辨荧光免疫层析定量检测方法并应用于乳制品中AFM1的检测。在线性范围0.05 ng/m L～2 ng/m L内,AFM1的线性拟合方程为Y=-45.53Lg X+26.68（R2=0.9870）,50%抑制浓度(The half maximal inhibitory concentration,IC50)为0.2041 ng/m L,检测限（Limit of detection,LOD）为0.0194 ng/m L。检测加标的牛奶样品,其回收率在83.48%～119.68%之间,相对标准偏差均低于8.11%。与近年来所报道的检测AFM1的方法相比,该方法检测限低、成本低,为快速筛选和定量分析提供了技术手段。（2）为了确保稳定可靠的定量信号输出,引入生物素-链霉亲和素（biotin-SA）独立系统,建立同时检测AFM1和OTA的双色荧光免疫层析技术,实现牛奶中混合真菌毒素的同步检测。与传统的方法不同之处,本研究将目标抗原和生物素-牛血清白蛋白（biotin-BSA）分别作为检测线和质控线,在预孵育时间为10 min、免疫层析时间为12min、双色荧光探针用量为3μL、完全抗原喷涂浓度为0.4 mg/m L等条件下,AFM1的线性拟合方程为Y=-28.47Lg X+29.81（R2=0.9845）,IC50=0.2087 ng/m L,LOD=0.0527ng/m L;OTA的线性拟合方程为Y=-36.06Lg X+51.34（R2=0.9736）,IC50=1.1187 ng/m L,LOD=0.1662 ng/m L。传统的双联检测回收率在42.97%～140.80%,波动范围大,稳定性差,而该方法回收率在90.16%～115.65%之间,变异系数低于7.41%。在37℃条件下可连续存储16天,即低温条件下货架期可达一年以上。应用该方法检测14份市售牛奶样品,其结果与仪器法的检测结果基本吻合。（3）为进一步提高双联试纸条的检测灵敏度和稳定性,在传统方法的基础上,建立基于二抗标记法的AFM1-OTA双联时间分辨免疫层析检测技术。通过探究抗体的标记量、样品稀释液中的甲醇浓度等参数,该方法中AFM1和OTA的检测灵敏度分别是0.0181 ng/m L和0.0363 ng/m L,比单抗标记法分别提高了5倍和3倍,不同批次的回收率介于89.65%～103.99%。在0.05 ng/m L～5 ng/m L线性范围内,AFM1的线性拟合方程为Y=-27.71Lg X+28.70（R2=0.9901）,IC50=0.1696 ng/m L;在0.05 ng/m L～10 ng/m L线性范围内,OTA的线性拟合方程为Y=-25.85Lg X+39.96（R2=0.9903）,IC50=0.4084 ng/m L,检测线性范围均可达到两个数量级,检测不同批次不同种类的牛奶样品,并通过国标方法进一步确证,且相关系数高于0.9789,说明该技术灵敏度高,准确可靠,在15 min内实现快速定量检测,为大批量样本的同步初筛奠定了良好基础。
其他文献
随机Loewner演变（Stochastic Loewner evolution,简称SLE）是一种集合的随机增长过程.它是当今数学上研究的一个热门课题,其涉及复分析,偏微分方程,概率论,统计物理与随机分析等重要思想.本文的主要工作如下：第一,讨论了SLEk的Cardy公式,利用SLEk的性质和超几何函数的性质,给出了当K>4时通弦随机Loewner演变（SLEk）横穿过一个长方形而不碰到长方形的
[研究目的]2020年9月27日,阿塞拜疆和亚美尼亚两国在纳卡地区发生冲突。阿方成体系、成建制、多批次运用无人机参与作战,赢得胜利,揭开了智能化战争的序幕。情报是作战的基础,是力量倍增器,深入研究新战争形态下的情报保障意义重大。[研究方法]本文通过剖析阿亚双方在纳卡冲突中的情报表现,着重阐述了阿方在战前与战时的情报保障,得出相关经验启示。[研究结论]纳卡冲突虽仅揭开了智能化战争的“冰山一角”,但建
随着科技发展，四元数矩阵的应用已渗透到结构力学、航天技术等领域，有关四元数矩阵计算问题也引起人们的关注。本文主要讨论四元数矩阵特征与反特征值问题，具体内容有：一、利用四元数矩阵的右特征主值，刻画四元数矩阵任意两个右特征值之差的模界限，给出四元数矩阵展形的定义。然后根据四元数矩阵复表示运算的性质，得到了四元数矩阵展形的上界估计式，并用数值算例验证了有关结果。二、讨论四元数亚正定矩阵A的收敛分裂，建立
离散可积系统是离散微分几何的一个重要内容，它与圆模式理论密切相关。本文研究了四边形图上离散可积系统的多维相容性及其拉格朗日结构。首先利用三维相容性的结果，证明了四边形图上离散KdV方程具有四维和五维相容性;还讨论了四边形图上一般离散方程的多维四面体性质。其次，根据四边形图上离散可积系统的作用泛函，推出该系统的拉格朗日循环结构与恒等式，给出交比系统的Cauchy问题解的存在唯一性条件。
矩阵的Drazin逆是矩阵广义逆理论中的一个重要部分，有着广泛的应用，如在求解奇异线性方程组、有限Markov链、控制理论及数值分析等方面。Drazin逆已然成为现代许多研究领域中不可缺少的重要工具。在近几十年，许多学者都致力于研究矩阵Drazin逆的扰动界及矩阵和的Drazin逆的表达式等问题，且都是在限定条件下给出的。本文在新的条件下，继续研究了这两类问题，内容安排如下：第一章介绍背景知识，本
本文讨论了在某些约束的条件下,分别得到了Drazin逆和Moore-Penrose逆的表示。本文安排如下：首先,在条件PQ=P下,我们用P，Q，Pd,（P±I）d来表示（P±Q）d。并用此结果得到了2×2块矩阵Drazin逆的表示。类似地,对P，Q满足等式P2Q=P2+Q,Q2P=Q2+P，我们在Banach空间中也做了相似的讨论。最后,研究了在Hilbert空间中,对不同限制条件下扰动算子Moo
软集理论是一种新的解决不确定性问题的数学工具,它成功地应用到了很多领域,取得了很大的成就.本文引入软点的概念,讨论了它的性质,介绍了软近似空间,研究了软集的拓扑结构,包括软拓扑空间的内部结构和软近似空间的拓扑结构.本文共计四章.第一章,我们介绍了相关的背景知识和软集的基本概念.第二章,引入软点的概念,讨论了它的性质,证明了能把软集转化为普通集来处理.第三章,揭示了软拓扑空间的内部结构,讨论了软连续
分数阶微积分算子的保记忆性（非局部性）能够优美地刻画现实问题,因此,进行分数阶微分方程的非局部边值问题的研究具有重要的理论意义和实际价值.全文共6章.第1章综述分数阶微分方程的研究背景和现状,以及本文研究的主要问题.第2章预备知识,介绍了分数阶微积分定义及性质、锥理论、半序方法、Leray-Schauder拓扑度、Kuratowski非紧性测度、不动点定理等有关理论.第3章通过Amann定理、锥理
随机Loewner演变（stochastic Loewner evolution,简称SLEκ）是驱动项为（?）乘以一个一维布朗运动的经典Loewner微分方程的解,它是一类集合随机增长的过程。这个过程与渗流丛的尺度极限和布朗运动的外边界有密切的联系。本文的主要工作如下：第一,讨论SLEκ与布朗运动不相交的概率估计。应用游弋测度的泊松核和黎曼P-函数,对导出的微分方程作一个变换,并将其转换成一个超
高层建筑连体结构中连廊与主体结构的连接是结构设计中的一个重要因素,其连接方式主要分为刚性连接和柔性连接,不同的连接方式有其不同的受力特点和适用范围。采用柔性连接的连体结构受力简明,可以有效耗散地震能量,降低连廊和两侧主体结构之间的相互影响,降低工程造价。本文通过一个具体工程案例,详细介绍了采用柔性连接的钢结构空中连廊连体结构的设计及分析过程,主要包括支座选取、两端塔楼弹塑性时程分析、钢连廊结构选型