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猪流感(Swine Influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起的一种急性、热性、高度接触性呼吸道传染病,是规模化养猪场的常发病之一,以高致病率、低死亡率为特征。本病极易与其他呼吸道病原混合感染,使其死亡率急剧升高,给养猪业造成巨大的经济损失。猪是猪流感、人流感及禽流感等多种流感病毒共同的易感宿主,流感病毒易在其体内重组而产生新的流感病毒株。同时,猪流感病毒不仅能感染猪,也能感染其他动物。因此,对猪流感病毒的研究不但有重要的兽医传染病学意义,更有深远的公共卫生意义。流感病毒因血清型多、易变异以及易产生耐药性等,疫苗接种及抗流感西药的疗效甚微,因此当前尚无猪流感特效药。所以,研究及开发抗猪流感病毒天然药物及其有效成分迫在眉睫。目的:本研究旨在细胞水平上探讨苦参主要成分的抗H3N2亚型猪流感病毒效果,并对其作用机制进行初步探索。研究结果将为抗流感机制的深入研究提供基础,为兽医临床及医学临床用药提供科学依据和参考,更为抗流感病毒天然药物的开发及研制奠定基础。方法:采用传统有机溶剂回流提取法、传统水提醇沉法分别制备苦参生物碱、黄酮、皂苷和粗多糖成分,以利巴韦林作为阳性对照药,选择犬肾上皮细胞株(MDCK细胞)作为H3N2猪流感病毒作用的细胞体系,通过细胞病变(CPE)观察法和噻唑蓝盐微量酶反应比色法(MTT法)定性、定量测定细胞状态,从而对苦参生物碱、黄酮、皂苷、粗多糖成分抗H3N2猪流感病毒作用加以比较,然后通过改变给药方式等条件对其作用机制进行初步探索。结果显示:高浓度的苦参生物碱、黄酮、皂苷、粗多糖均会影响MDCK细胞的生长状态,其最大安全浓度分布在6.9μg/ml~1.5138 mg/ml之间,其中皂苷成分的毒性作用最小,浓度为1.5138 mg/ml时仍不表现细胞毒性作用。对四种成分体外抗SIV作用的研究发现,四种成分都能显著性抑制H3N2猪流感病毒,其中生物碱和粗多糖成分的效果优于利巴韦林。此外,⑴四种成分均能明显抵抗SIV的吸附,皂苷效果优于利巴韦林;⑵四种成分均能干扰病毒复制,生物碱的作用优于利巴韦林;⑶四种成分与病毒同时接触细胞时,均有显著抑制SIV作用,皂苷的效果优于利巴韦林;⑷四种成分均有体外直接杀灭病毒作用,生物碱的作用优于利巴韦林。苦参四种成分的最小有效剂量分布在0.1078μg/ml~19.2μg/ml之间,其中苦参黄酮的最小有效浓度最低;治疗指数在32~128之间,皂苷成分的治疗指数最高。苦参成分与病毒同时接触细胞时,各成分均呈现出明显的剂量效应关系。结论:苦参生物碱、黄酮、皂苷、粗多糖成分均有抗H3N2猪流感病毒作用,其中皂苷干扰病毒吸附的作用最强且能有效阻止病毒与细胞的结合,生物碱干扰病毒复制和直接杀病毒的作用最强。