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第一部分β2-AR及AKR1B1在胰腺导管腺癌组织中的表达及其临床意义目的研究精神因素相关信号分子β2-肾上腺素能受体（β2-adrenergic receptor,β2-AR）及醛固酮类还原酶1 B1（aldo-keto reductase family 1 member B1,AKR1B1）在胰腺导管腺癌（Pancreatic duct adenocarcinoma,PDAC）组织中的表达及其与患者临床病理参数间的关系,初步探讨组织中β2-AR及AKR1B1表达对PDAC的预后评估价值。方法采用免疫组化方法检测138例手术切除胰腺导管腺癌组织及部分癌旁组织标本中的β2-AR及AKR1B1表达,Western blot（WB）法检测了4对新鲜胰腺癌及其癌旁组织中β2-AR和AKR1B1表达。Pearson相关分析β2-AR和AKR1B1两者总得分间的相关性;比较分析β2-AR及AKR1B1表达水平与各临床病理参数之间的关系;同时对术后患者进行随访,对胰腺导管腺癌患者生存期进行统计描述分析;采用logrank单因素生存分析及Cox比例风险回归模型多因素分析β2-AR、AKR1B1及各临床病理参数对胰腺导管细胞腺癌患者的预后判断价值;应用Kaplan-Meier法作生存分析并绘制累积生存函数图及累积风险函数图。结果（1）免疫组化检测结果显示β2-AR和AKR1B1主要在细胞质中表达,而β2-AR还会在细胞膜上有表达,AKR1B1在细胞核中有表达,β2-AR和AKR1B1两者在相应的癌旁组织中也有低度表达,但着色强度低于癌组织;WB结果与免疫组化结果类似,β2-AR和AKR1B1在胰腺癌及癌旁组织中均有表达,但胰腺癌组织中的表达水平略高于癌旁组织。（2）Pearson相关分析显示PDAC组织中β2-AR的表达水平与AKR1B1表达水平具有相关性（r=0.2061,P=0.0153）;（3）β2-AR或AKR1B1的表达在PDAC患者不同性别、不同年龄段（<65岁vs.≥65岁）、肿瘤不同部位（头颈vs.体尾）、肿瘤不同大小（≤3 cm vs.>3 cm）、有无远处结转移、不同分化程度、不同TNM分期及不同CEA和CA-199水平间差异均没有统计学意义（P均>0.05）,而在有、无淋巴结转移间β2-AR（P=0.014）及AKR1B1（P=0.024）表达差异均有统计学意义。（4）生存相关单因素分析结果显示有无淋巴结及远处转移、不同分化程度、不同TNM分期、β2-AR及AKR1B1表达水平分别与胰腺癌患者生存期长短均有相关性（P均<0.05）,但经Cox比例风险回归模型分析仅淋巴结转移、远处转移、β2-AR及AKR1B1表达水平为影响PDAC患者生存期的独立指标（P均<0.05）。Kaplan-Meier分析显示β2-AR和AKR1B1在PDAC中表达水平与患者生存率呈负相关（P均<0.05）。结论（1）β2-AR及AKR1B1在胰腺导管腺癌组织中的表达存在相关性,且与患者有无淋巴转移有关;（2）淋巴转移、远处转移及β2-AR及AKR1B1表达水平为影响胰腺导管腺癌患者预后的独立因子,发生淋巴结转移及远处转移、β2-AR及AKR1B1高表达可增加胰腺导管腺癌患者的生存风险。第二部分β2-AR通过活化AKR1B1促进胰腺癌细胞的增殖及转移机制研究目的探讨胰腺癌中精神因素相关信号分子β2-肾上腺素能受体（β2-adrenergic receptor,β2-AR）募集并活化醛固酮类还原酶1 B1（aldo-keto reductase family 1 member B1,AKR1B1）并促进胰腺癌细胞增殖、转移的分子机制。方法（1）使用免疫印迹法（Western blot,WB）分析了正常胰腺导管上皮细胞株h TERT-HPNE、人胰腺癌细胞株BXPC-3、CFPAC-1及PANC-1提取蛋白中β2-AR和AKR1B1的表达;免疫共沉淀法验证BXPC-3胰腺癌细胞中β2-AR与AKR1B1的相互作用;细胞免疫荧光检测β2-AR与AKR1B1在BXPC-3胰腺癌细胞系中的共定位情况;（2）分别在β2-AR表达相对较低的CFPAC-1细胞中转染p CDNA3.1-β2AR过表达载体质粒,在AKR1B1表达相对较低的PANC-1细胞中转染p CMV-AKR1B1过表达载体质粒,Western blot检测β2-AR、AKR1B1、P-ERK1/2及ERK1/2蛋白表达水平;CCK-8检测转染后CFPAC-1及PANC-1细胞增殖能力,Annexin V-FITC、PI染色检测CFPAC-1及PANC-1细胞凋亡和细胞周期的变化;（3）在胰腺癌细胞BXPC-3中通过使用β2-AR抑制剂（ICI 118,551盐酸盐）100μmol/L来抑制β2-AR的表达,24 h后观察β2-AR、AKR1B1、p-ERK1/2、ERK1/2的表达水平,同时观察β2-AR抑制剂使用后对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。（4）以10 mmol/L的ISO（β2-AR激动剂）及ISO+ICI 118,551刺激BXPC-3胰腺癌细胞后24、48 h,观察BXPC-3胰腺癌细胞迁移能力;竞争ELISA法检测AKR1B1主要合成产物前列腺素F2α（prostaglandin F2α,PGF2α）水平,Western blot方法检测胰腺癌BXPC-3细胞中促转移相关分子基质金属蛋白酶-2（matalloproteinases2,MMP-2）及基质金属蛋白酶-9（matalloproteinases 9,MMP-9）的表达。结果（1）β2-AR在正常胰腺导管上皮细胞株h TERT-HPNE中表达最弱,人胰腺癌细胞株BXPC-3、CFPAC-1及PANC-1中均有表达,以PANC-1中表达最强;而AKR1B1在四株细胞中的表达以CFPAC-1中最强,PANC-1中最低,免疫共沉淀显示在胰腺癌细胞BXPC-3中β2-AR与AKR1B1存在相互作用。免疫荧光检测显示两种蛋白在BXPC-3胰腺癌细胞中存在共定位;（2）与对照组相比,β2-AR及AKR1B1过表达可分别显著促进CFPAC-1、PANC-1细胞增殖,降低早期凋亡细胞百分比,流式细胞仪分析显示,S期CFPAC-1、PANC-1细胞的比例明显升高,G0及G1期细胞百分比降低（P均<0.05）。同时,β2-AR过表达可导致AKR1B1蛋白表达显著增多,而过表达AKR1B1可反馈轻度抑制β2-AR表达。与对照组相比,β2-AR及AKR1B1过表达后P-ERK1/2水平均明显升高,总ERK1/2水平无明显变化;（3）使用ICI 118,551盐酸盐抑制BXPC-3细胞β2-AR的表达后,与对照组相比,ICI 118,551组中β2-AR蛋白水平显著降低,AKR1B1和p-ERK1/2的表达也降低,但对总ERK1/2没有影响。抑制β2-AR可降低BXPC-3细胞的增殖、增加细胞凋亡率、减少处在S期的BXPC-3细胞;（4）β2-AR激动剂刺激BXPC-3胰腺癌细胞24、48 h后,可增加细胞迁移能力,缩小划痕区面积,同时可增加AKR1B1的表达,与对照组比较,β2-AR激动剂刺激组AKR1B1产物前列腺素PGF2α水平及促转移相关分子MMP-2及MMP-9蛋白表达量增加。结论（1）AKR1B1是β2-AR的一个潜在的相互作用的配体,可相互作用及共定位,β2-AR可通过活化AKR1B1上调P-ERK1/2的表达促进胰腺癌细胞增殖;（2）β2-AR介导的AKR1B1活化可增加AKR1B1产物——肿瘤相关多通路激活因子前列腺素PGF2α的合成及促转移相关分子MMP-2及MMP-9的表达,从而引起胰腺癌的转移;（3）β2-AR/AKR1B1轴可能与慢性应激性胰腺癌相关,且可能为一个潜在的胰腺癌干预靶标。