背景及目的乳腺癌是全世界范围内女性发病率最高的恶性肿瘤之一,而其中三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）恶性程度最高,预后最差。本研究即通过对E2F家族成员在乳腺癌中表达水平的检测,筛选出了乳腺癌潜在相关基因E2F5,并通过临床病理特征及预后分析研究其与乳腺癌的相关性,进而通过体内、体外的一系列实验,揭示E2F5的在TNBC中的生物学功能,并进一步探讨E2F5发挥作用的可能的分子机制。方法本课题采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT–PCR）方法检测了E2F家族基因在10对乳腺癌组织与癌旁组织中的表达,并进一步通过TCGA（the Cancer Genome Atlas）和GEO（Genome Expression Omnibus）数据库中的公共数据进行验证。采用免疫组织化学（immunohistological chemistry,IHC）方法检测E2F5在258例乳腺癌组织及60例癌旁组织中的表达,分析组织水平上E2F5蛋白表达与258例乳腺癌患者临床病理特征及预后之间的关系。在细胞水平的实验中,通过慢病毒稳定转染与si RNA瞬时转染技术构建E2F5过表达细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468和敲降细胞株SUM159、BT549,并通过平板克隆形成实验、CCK-8实验、裸鼠体内成瘤实验、Transwell迁移与侵袭实验、成球培养实验等研究E2F5对TNBC细胞增殖、迁移、侵袭以及肿瘤干细胞特性的影响,并通过CCK-8法检测E2F5基因敲降对三阴性乳腺癌细胞化疗药物敏感性的影响。采用q RT-PCR检测细胞干性、化疗耐药和上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的相关标志物。进一步在E2F5过表达细胞系中通过si RNA瞬时转染敲降ZEB2的表达,Western blot法检测si RNA对ZEB2的敲降效率,采用低吸附板成球培养法检测ZEB2基因沉默对E2F5过表达三阴性乳腺癌细胞干细胞特性的影响。结果RT-PCR结果显示E2F基因家族m RNA在乳腺癌组织中表达上调,其中E2F1、E2F3和E2F5上调最为显著,结合TCGA、GEO公共数据的表达分析结果筛选出了差异表达最显著的基因E2F5。免疫组化结果显示在乳腺癌组织中E2F5阳性表达率为36.0%,而癌旁组织中E2F5不表达（P<0.001）。在E2F5阳性与阴性两组患者中统计临床病理特征,结果显示,E2F5表达与患者年龄、绝经期状态、TNM分期、淋巴结转移以及分子分型有关,在年龄≤45岁组、未绝经组、有淋巴结转移组、III期组的表达阳性率较年龄>45岁组、绝经组、无淋巴结转移组、I-II期组更高,表达率有统计学差异（P<0.001）;在TNBC组阳性率为61.5%,显著高于Luminal B组、Luminal A组及Her-2组（p<0.001）。Kaplan-Miere生存分析表明,E2F5阴性组患者的无病生存和总生存均优于阳性组（P<0.001）,亚组分析显示在三阴性乳腺癌中尤为明显。而Cox回归分析结果则说明E2F5蛋白表达是乳腺癌独立风险因素（OR=1.587,95%CI=1.355-2.386,P=0.027）。体外实验中,CCK-8、克隆形成及体内成瘤实验结果表明过表达E2F5显著促进TNBC细胞的增殖,Transwell实验表明E2F5显著促进三阴性乳腺癌细胞的体外迁移和侵袭能力。成球培养实验中敲降E2F5能够降低三阴性乳腺癌干细胞特性,且q PCR检测发现CD44、SOX2和SOX9等干性相关标志物显著下调。同时,敲降E2F5能够增加TNBC细胞对阿霉素、紫杉醇和吉西他滨等化疗药物的敏感性,并可导致多药耐药基因MDR1和BCRP表达水平降低。RT-PCR检测发现E2F5与EMT的发生显著相关,并影响包括ZEB2在内的多种EMT相关转录因子的表达水平。进一步敲降ZEB2表达后,成球培养实验表明敲降ZEB2可逆转E2F5对三阴性乳腺癌细胞的干性增强作用。结论本研究表明E2F5在乳腺癌的发生、转移以及复发中起着重要作用。E2F5在体内和体外水平都能促进三阴性乳腺癌细胞的干细胞特性,表现为增强三阴性乳腺癌的增殖、迁移、侵袭、成瘤能力及化疗抵抗性。E2F5通过促进EMT相关转录因子ZEB2表达,促进三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化,提高三阴性乳腺癌细胞干细胞特性。