免疫增强剂对提高疫苗的免疫原性、增强动物传染性疾病的防制效果具有重要意义。同时,增强免疫、提高机体的抗病力也是防治动物普通疾病的重要措施。本研究为两个国家自然科学基金项目的部分内容。一是探讨了两个中药成分复方的免疫增强作用和机理,为研制开发新型中药免疫增强剂奠定基础；二是从免疫学的角度研究了中药新促孕液防治母畜子宫内膜炎的药理作用,为改进中药新促孕液的组方、提高其疗效提供理论依据。试验分为以下八个部分。 试验Ⅰ、中药成分复方和相应的中药复方的制备 分别用水煎醇沉法提取淫羊藿多糖和黄芪多糖,用硫酸蒽酮法测定其含量；用酸碱沉淀法提取蜂胶黄酮,用芦丁法测定其含量；购买市售人参皂甙,用TLC分光光度法测定其含量。然后按一定比例配制淫-蜂复方中药成分免疫增强剂(cCHMI1)和参-芪复方中药成分免疫增强剂(cCHMI2)。另取淫羊藿、黄芪和人参煎剂,用101沉淀剂去除杂质,蜂胶乙醇液精滤,精制成注射液,测定相应中药成分的含量,配制成与中药成分复方含量相同的2个中药复方(cCHM1和cCHM2)。从而为以下试验做好准备。 试验Ⅱ、中药成分复方的安全性测定 分别用家兔点眼法、家兔股四头肌注射法和小鼠腹腔注射法测定了2个中药成分复方的局部刺激性和急性毒性。结果,2个中药成分复方对家兔眼结膜和注射局部肌肉无任何刺激性。cCHMI1出现中毒反应的剂量是临床应用剂量的9.3倍,LD50为211.54±32.37 mg·kg-1;cCHMI2出现中毒反应的剂量是临床应用剂量的314.9倍,LD50为8435.29±1379.28 mg·kg-1。表明,2个中药成分复方的安全范围较宽,按照常规剂量应用是绝对安全的。 试验Ⅲ、中药成分复方免疫增强效果的观察 为验证2个中药成分复方的免疫增强作用,以2个中药成分复方为免疫佐剂,分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔和配合鸡新城疫灭活苗免疫雏鸡,测定兔、鸡血清抗体效价和雏鸡外周血T淋巴细胞增殖的动态变化。结果表明,2个中药成分复方能显著提高兔、鸡的血清抗体效价,增强雏鸡外周血T淋巴细胞增殖,具有较好的免疫佐剂活性。 试验Ⅳ、中药成分复方与相应的中药复方增强免疫效果的比较 将2个中药成分复方cCHMI1、cCHMI2和2个相应的中药复方cCHM1和cCHM2分别与新城疫灭活苗混合制成疫苗免疫雏鸡,以油佐剂苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后第7、14、21、28、35、42天用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化。结果表明,4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价,效果与油佐剂苗相当；中药成分复方稍优于中药复方,cCHMI1的效果优于cCHMI2。 试验Ⅴ、中药新促孕液及其主要组分药和相关单味药对全身免疫功能的影响 取间情期新西兰母兔随机分组,分别灌胃新促孕液、主要组分药淫羊藿、益母草和红花以及相关单味药黄柏、丹参和黄芪煎剂,每日1次,连续7天,于第8天心脏采血,测定血常规、T淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤力和血清IL-2含量的变化。另对成年雌性小鼠作同期发情和配种处理,取分娩小鼠分组,子宫灌注以上各药,每天1次,连续4天,于最后一次灌注后次日捕杀,取脾脏检测T淋巴细胞增殖和NK细胞杀伤力。结果,新促孕液、淫羊藿、丹参和黄芪能显著提高兔外周血的T淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤力和血清IL-2含量,显著提高小鼠脾脏NK细胞杀伤力。表明,新促孕液能增强全身免疫功能,其中淫羊藿起主要作用,丹参和黄芪可作为改进新促孕液组方的候选药。 试验Ⅵ、新促孕液及其主要组分药和相关单味药对局部免疫功能的影响 取成年雌性小鼠随机分组,分别灌胃新促孕液、主要组分药淫羊藿、益母草和红花以及相关单味药黄柏、丹参和黄芪煎剂,每天1次,连续7天,于第8天处死,切取子宫切片；同时对成年雌性小鼠作同期发情处理、配种,取当日分娩小鼠分组,子宫灌注以上各药,每天1次,连续4天,于最后一次灌注后次日捕杀,切取子宫切片。用切片测定子宫局部白细胞密度、肥大细胞数量和iNOS表达的变化。结果,新促孕液和淫羊藿,益母草、红花和丹参煎剂口服可以明显提高子宫iNOS的表达,丹参还可提高子宫白细胞密度、肥大细胞数量；新促孕液和淫羊藿、丹参和黄芪煎剂子宫灌注可显著提高子宫白细胞密度和肥大细胞数量。表明,新促孕液可以增强子宫局部免疫功能,淫羊藿和益母草起主要作用,丹参和黄芪可作为改进新促孕液组方的候选药。 试验Ⅶ、新促孕液及其加味方对全身免疫功能的影响 以新促孕液为基本方,分别加入丹参、黄芪制备两个加味方。取成年母兔随机分组,分别灌胃新促孕液和两个加味方,每天1次,连续7天,于第8天心脏采血,测定外周血T淋巴细胞增殖、NK细胞活力和血清IL-2含量；同时取成年母兔子宫灌注病原菌制备子宫内膜炎模型,分组分别子宫灌注新促孕液和2个加味方治疗,对照组灌注生理盐水,每天1次,连续7天,于第8天采血检测外周血T淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤力。结果,新促孕液可明显促进健康兔和子宫内膜炎模型兔的T淋巴细胞增殖、提高NK细胞杀伤力,提高健康兔血清IL-2含量,丹参加味方能明显促进健康兔T淋巴细胞增殖和提高血清IL-2含量。表明,新促孕液和2个加味方能不程度地提高全身免疫功能,以新促孕液的作用最强。 试验Ⅷ、新促孕液及其加味方对局部免疫功能的影响 取成年雌性小鼠,同期发情处理后随机分组,分别灌胃新促孕液和2个加味方,每天1次,连续7天,于第8天处死小鼠,取子宫切片,检测白细胞密度、肥大细胞数量和iNOS的表达；制备兔子宫内膜炎模型,分组分别子宫灌注新促孕液和2个加味方治疗,对照组灌注生理盐水,每天1次,连续7天,于第8天处死,取子宫切片测定子宫白细胞密度,匀浆测定TNF-a含量。结果,新促孕液能显著促进小鼠子宫iNOS的表达、提高家兔子宫白细胞密度和TNF-a含量,黄芪加味方能显著提高家兔子宫白细胞密度和TNF-a含量,丹参加味方能显著促进小鼠子宫iNOS的表达和提高家兔子宫TNF-a含量。表明,新促孕液和2个加味方均可以提高子宫局部的免疫功能。