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[目的]1、探索人和小鼠阴道上皮细胞原代培养方法是否一致,并鉴定细胞类型是否为所需细胞。2、观察与白假丝酵母菌共培养后阴道上皮细胞损伤情况。3、研究不同Sap酶活性的白假丝酵母菌对阴道上皮细胞表达NLRP3炎性小体的影响。4、比较人和小鼠阴道上皮细胞表达NLRP3炎性小体及其诱导分泌的细胞因子趋势是否一致。[方法]1、获取人和小鼠阴道上皮组织后,进行体外细胞培养,使用DispaseⅡ酶及胰酶分步消化法分离人和小鼠阴道上皮细胞,用角化细胞无血清培养基（K-SFM）培养,当细胞汇合度达80%～90%时进行下一步的传代培养;倒置相差显微镜观察细胞生长情况,用细胞角蛋白（广谱）抗体试剂对细胞进行鉴定。2、收集外阴阴道假丝酵母菌病（vulvovaginal candidiasis,VVC）患者的阴道分泌物后四区划线法纯化菌株,安图念珠菌显色培养基平板鉴定为白假丝酵母菌,并用牛奶培养基平板检测Sap酶活性。从中选取Sap酶活性最强和最弱的白假丝酵母菌菌株各4株分别与人和小鼠阴道上皮细胞共培养,空白对照组只加K-SFM培养液,于6h、12h、24h、48h收集细胞上清液并用4%多聚甲醛固定细胞。3、用免疫荧光技术法检测人和小鼠阴道上皮细胞中NLRP3炎性小体表达情况;ELISA法检测阴道上皮细胞上清液中IL-1β和IL-18的水平;经HE染色后观察阴道上皮细胞加菌前后形态变化情况。4、用SPSS 24.0软件进行分析,计量资料以x±s表示,组内均数比较采用的是配对样本t检验,多组间均数比较采用的是单因素方差分析及两两比较的SNK-q检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。用GraphPad Prism 6.0软件绘制统计柱状图。[结果]1、倒置相差显微镜下观察人和小鼠阴道上皮细胞传到孔里后48h,可看到部分细胞触角向外延伸,开始贴壁生长,大部分细胞还成光亮的圆形漂浮在细胞培养液中;至6～7天时贴壁细胞数可达70%～80%,阴道上皮细胞呈铺路石样生长,形态为多角形,轮廓清晰,折光线好。细胞角蛋白（广谱）抗体免疫细胞化学染色显示,细胞质均匀的染上了棕色,结果判定为阳性。2、HE染色显示,空白对照组的阴道上皮细胞边界清晰,饱满,折光性好;而人和小鼠阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养48h后可看到大部分细胞边界模糊,部分已裂解,活力较差。3、人和小鼠阴道上皮细胞与不同Sap酶活性的白假丝酵母菌共培养后,阴道上皮细胞表达的NLRP3炎性小体水平在早期即达高峰,其后随着时间推移,与白假丝酵母菌共培养的阴道上皮细胞逐渐裂解,到48h时可看到细胞破裂死亡,荧光随之减弱,Sap酶活性强组NLRP3炎性小体水平下降趋势更明显,而空白对照组的细胞形态从始至终都是完整的,荧光量保持相对稳定。此外,人阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养6h、12h、48h,空白对照组表达的NLRP3炎性小体水平与Sap酶活性弱组和Sap酶活性强组的表达相比的差异是具有统计学意义的（P<0.05）。Sap酶活性强组在12h时与Sap酶活性弱组的NLRP3炎性小体水平存在显著差异（P<0.05）;而小鼠阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养6h、12h、24h、48h,Sap酶活性弱组和Sap酶活性强组与空白对照组的NLRP3炎性小体水平相比差异均具有统计学意义（P<0.05）。Sap酶活性强组在6h、12h、48h时与Sap酶活性弱组的NLRP3炎性小体水平差异均具有统计学意义（P<0.05）。4、人和小鼠阴道上皮细胞表达IL-1β和IL-18水平均呈现6h达峰值后逐渐下降趋势,至48h时随着细胞膜的破裂,细胞内的IL-1β和IL-18全部被释放出来,又出现了小幅度的回升。在共培养早期,空白对照组的人和小鼠阴道上皮细胞表达的IL-1β水平与Sap酶活性弱组和Sap酶活性强组表达的差异均具有统计学意义（P<0.05）,Sap酶活性强组IL-1β水平在6h、12h、48h与Sap酶活性弱组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。人阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养后Sap酶活性弱组IL-18水平仅在48h检出与空白对照组存在表达差异,在6h、12h、48h,空白对照组与Sap酶活性强组的IL-18水平差异具有统计学意义（P<0.05）。而小鼠Sap酶活性弱组和Sap酶活性强组在6h、12h、48h时,IL-18水平与空白对照组相比较差异均具有统计学意义（P<0.05）;此外,Sap酶活性强组与Sap酶活性弱组IL-18水平在6h、12h、24h检出有明显差异（P<0.05）。[结论]1、人和小鼠阴道上皮细胞均可采用酶分步消化法进行原代培养,该方法可以用最短的时间来获取较高纯度和较好活性的阴道上皮细胞,为研究不同Sap酶活性的白假丝酵母菌对阴道上皮细胞表达NLRP3炎性小体的影响奠定了良好的基础。2、阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养后,白假丝酵母菌由酵母相变为菌丝相,对阴道上皮细胞产生了损伤作用。3、VVC致病白假丝酵母菌可以刺激阴道上皮细胞表达更多的NLRP3炎性小体、IL-β和IL-18,Sap酶活性强的白假丝酵母菌作用更强。4、小鼠和人阴道上皮细胞与不同Sap酶活性的白假丝酵母菌共培养后的炎症反应变化趋势一致,因此在不便进行人体体内实验时,小鼠可作为较好的模式动物。