【摘 要】
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目的:苯并芘（benzo（a）pyrene,BaP）是一种普遍存在于环境中内分泌干扰物。课题组前期研究发现BaP暴露会影响胚胎植入及孕早期卵巢黄体功能,但其机制有待深入研究。有研究表明自噬参与了妊娠黄体功能的维持。线粒体自噬作为自噬形式之一,在清除受损线粒体,维持正常线粒体功能方面发挥着重要作用。而线粒体又是体内类固醇激素合成的中心部位,其功能异常将影响卵巢功能。本研究旨在探讨BaP暴露对孕早期卵
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目的:苯并芘（benzo（a）pyrene,BaP）是一种普遍存在于环境中内分泌干扰物。课题组前期研究发现BaP暴露会影响胚胎植入及孕早期卵巢黄体功能,但其机制有待深入研究。有研究表明自噬参与了妊娠黄体功能的维持。线粒体自噬作为自噬形式之一,在清除受损线粒体,维持正常线粒体功能方面发挥着重要作用。而线粒体又是体内类固醇激素合成的中心部位,其功能异常将影响卵巢功能。本研究旨在探讨BaP暴露对孕早期卵巢线粒体自噬的影响及其潜在的分子机制。方法:（1）建立孕鼠染毒模型:将妊娠小鼠随机分为对照组和BaP组,BaP组从妊娠第一天起以0.1m L/10g体质量给予0.2mg/kg/d的BaP剂量进行灌胃,对照组灌胃等体积玉米油,分别于妊娠第4、7天收取卵巢。（2）建立细胞染毒模型:以人卵巢颗粒细胞KGN为载体,使用1.0 IU/ml h CG诱导颗粒细胞黄体化模拟体内孕早期卵巢黄体化过程,同时联合0.5μmol/L BPDE体外染毒24h。（3）探讨BaP以及BPDE对于自噬的影响:TEM观察体内外卵巢颗粒细胞中自噬体存在情况,Western blot、q RT-PCR和IF检测自噬体形成及降解过程中的标志分子ULK1、BECLIN1、ATG5、ATG7、LC3、P62表达水平。（4）探讨BaP以及BPDE对于线粒体自噬的影响:Western blot检测线粒体自噬相关基因PINK1、PARKIN的表达,IF检测TOM20与LC3、TOM20与PARKIN共定位情况。（5）研究BaP和BPDE是否通过影响ANT1干扰线粒体自噬:Western blot、q RT-PCR检测体内外ANT1表达情况,构建过表达ANT1的细胞模型,观察ANT1是否参与调控BPDE暴露抑制线粒体自噬过程。结果:（1）BaP暴露抑制妊娠早期小鼠卵巢颗粒细胞自噬。（2）体外BPDE暴露抑制黄体化KGN细胞自噬。（3）BaP及BPDE暴露通过影响PINK1/PARKIN在线粒体的募集分别在体内外抑制卵巢颗粒细胞线粒体自噬。（4）BaP及BPDE暴露分别在体内外抑制ANT1表达,影响线粒体功能。（5）过表达ANT1挽救了BPDE对线粒体自噬的抑制作用,改善了线粒体功能,上调了雌、孕激素相关酶的mRNA水平。结论:本研究表明BaP及其代谢物BPDE暴露抑制体内外卵巢颗粒细胞自噬,通过ANT1-PINK1-PARKIN轴干扰线粒体自噬,影响线粒体功能,从而导致卵巢雌、孕激素合成减少。在黄体化KGN细胞内过表达ANT1,可在一定程度上挽救BPDE暴露所抑制的线粒体自噬及线粒体功能损伤,恢复黄体化卵巢颗粒细胞功能。
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