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目的探讨AQP1在人脑胶质瘤组织中的表达情况及其与临床病理参数、患者预后的关系。构建AQP1过表达慢病毒载体并感染LN229细胞株,探讨过表达AQP1后对胶质瘤细胞增殖及侵袭等多种生物学行为的影响。探讨脑胶质瘤组织中AQP1和β-catenin表达的相关性,进一步阐明其相关分子机制,从而全面了解AQP1蛋白的功能,为临床治疗恶性胶质瘤提供新的靶点。方法1.收集天津医科大学肿瘤医院神经肿瘤科手术切除的186例胶质瘤石蜡标本,整理临床病例资料,并对其中135例资料完整的患者进行随访。2.应用免疫组织化学法检测胶质瘤组织中AQP1、β-catenin的表达情况,并比较其在不同级别胶质瘤中的表达差异,分析其与临床病理参数、患者预后关系及两者相关性。3.应用蛋白质免疫印迹检测正常脑组织、良性肿瘤及胶质瘤中AQP1的表达。4.构建插入m GFP荧光标签的重组慢病毒载体,用PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-m GFP作为对照组,AQP1连接入双酶切后线性化的PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-m GFP重组慢病毒载体中作为实验组。5.利用HEK-293T细胞包装上述两组重组质粒的慢病毒并分别转染LN229细胞。通过嘌呤霉素(puro)筛选出稳定表达的细胞并命名为AQP1/LN229,vector/LN229。6.Western blotting技术验证其表达效率,并筛选出稳定表达的克隆。7.利用MTT实验检测连续培养7 d两组胶质瘤细胞的增殖情况。8.利用Brd U标记实验检测两组胶质瘤细胞的增殖能力。9.利用软琼脂克隆形成实验检测连续培养2周后两组胶质瘤细胞克隆形成能力。10.应用Transwell侵袭实验检测两组胶质瘤细胞的体外侵袭能力。11.Western blotting技术检测AQP1蛋白过表达后,β-catenin的表达情况。结果1.AQP1在高级别胶质瘤的表达量高于低级别胶质瘤,并且随着胶质瘤病理级别的升高,AQP1的表达增高(P<0.05)。AQP1表达水平与患者年龄、性别、肿瘤大小、瘤周水肿、肿瘤部位无相关性(P>0.05)。2.Western blotting显示AQP1在胶质瘤组织中表达升高,并且在高级别胶质瘤中的表达明显高于低级别胶质瘤。3.Kaplan-Meier分析显示AQP1表达水平与患者总生存时间及无进展生存时间呈负相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.单因素生存分析表明AQP1、β-catenin、病理分级、年龄和肿瘤大小与患者总体生存时间及无进展生存时间有关。5.在多因素生存分析中,AQP1和病理分级是患者总体生存和无进展生存的独立预后指标。6.脑胶质瘤组织免疫组化染色结果显示AQP1的表达与β-catenin的表达呈正相关(rs=0.168,P=0.022)。7.免疫印迹结果显示AQP1/LN229细胞中AQP1蛋白的表达比LN229细胞以及对照细胞vector/LN229显著增强。表明通过慢病毒质粒得到了稳定过表达AQP1的LN229细胞。8.MTT实验证明AQP1/LN229细胞的增殖能力比vector/LN229显著增强(P<0.05)。9.Brd U标记实验证明,与vector/LN229组细胞相比,AQP1/LN229细胞的增殖能力显著增强(P<0.05)。10.软琼脂克隆形成实验表明AQP1过表达细胞的克隆形成能力比空载体对照组显著增强(P<0.05)。11.Transwell侵袭试验结果显示,转染AQP1慢病毒表达质粒后,LN229细胞穿膜数量明显增加,高于阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。12.应用Western blotting方法分析显示,AQP1/LN229细胞中β-catenin水平与vector/LN229细胞比较显著增强。结论1.AQP1定位在人脑胶质瘤细胞质和细胞膜,AQP1在胶质瘤组织中高表达,且其表达水平与病理分级呈正相关,与患者总生存及无进展生存呈负相关。2.胶质瘤组织中AQP1表达与β-catenin表达呈正相关。3.多因素生存分析表明AQP1、病理分级是胶质瘤患者的独立预后指标。4.过表达AQP1导致胶质瘤细胞的增殖能力、运动能力和侵袭能力显著增强。5.过表达AQP1的胶质瘤细胞中,β-catenin表达增强。