嗜热黄原胶降解菌的诱变育种及产酶条件优化

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黄原胶又称汉生胶,它是一种水溶性多糖。黄原胶由于其良好的水溶性、独特的流变性及对酸碱的稳定性而被作为石油开采中重要的工作液增稠剂,然而它不易降解的特性给原油的后续处理带来了难度,因此有效的降解黄原胶是石油开采过程中的关键工序。高温油田一般采用化学方法破胶,这种方法不仅效率低而且会造成环境污染,给地质带来严重的破坏。生物酶解法具有安全、有效且对环境无污染等特点,近年来备受关注。本实验旨在对前期鉴定的一株嗜热黄原胶降解菌HT-1进行硫酸二乙酯-紫外复合诱变以提高其降解黄原胶的能力,并进行优良突变株产酶条件的优化,为石油工业中能降解黄原胶,降低原油粘度,提高开采效率提供适用的工程菌。对黄原胶降解菌HT-1进行硫酸二乙酯诱变,发现最佳诱变时间为30min,筛选得到两株遗传稳定性良好的突变株,命名为DE-2和DE-14,测定其降粘率分别为36.3%和35.3%,与出发菌HT-1相比降粘率分别提高了15.0%和14.3%。再继续对这两株优良菌株进行紫外诱变,发现最佳诱变时间为240s,经过筛选得到一株突变株DE-2.3,它的降粘率为44.1%,相比出发菌HT-1其降粘率提高了22.6%。以菌株DE-2.3为研究对象,通过单因素实验和响应面实验对其产酶培养基和发酵条件进行优化,得到最佳产酶培养基为(1L):3g黄原胶,3g磷酸氢二铵,0.25g氯化钙,0.25g磷酸氢二钾,0.4g氯化钠,0.125g硫酸镁,0.35g硝酸钾;最优发酵产酶条件为温度50℃、转速120r/min、初始pH7.5。在优化后的培养基和发酵条件下对DE-2.3进行发酵培养,摇瓶20h时,该菌株产酶活力最高可达483.7U.L。在优化的发酵培养基和最适的培养条件下对黄原胶降解菌DE-2.3进行逐级放大培养,发现在250mL、500mL和1L的摇瓶培养中,DE-2.3产降解酶活力的趋势和酶活力大小基本一致,但是将其接种于5L发酵罐中培养时,虽然其产酶活力趋势与摇瓶体系大致相同,但是黄原胶降解酶的最高活力下降了24.3%。
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