ARE结构对骨骼肌损伤后mRNA表达异质性影响研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:anbao01
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目的:应用RT-qPCR技术检测大鼠骨骼肌挫伤后有ARE结构的mRNA(AREs-mRNAs)和无ARE结构的mRNA(non-AREs mRNAs)的表达量,探索有、无ARE结构mRNA表达异质性(个体间表达差异)之间的差异,以期为用于损伤时间推断指标的筛选提供帮助。方法:成年Sprague-Dewley大鼠108只,随机分为正常对照组、损伤后4h,8h,12h,16h,20h,24h,28h,32h,36h,40h,44h和48h组,重力锤自由落体制备骨骼肌损伤模型。实验共分为三组,分别为实验组(n=6)、随机抽样组(n=3)和样本增多组(n=6+2),其中随机抽样组利用Excel中INDERECT函数从实验组每组6个样本中随机抽取3个;样本增多组是在实验组基础上对照组增加6个样本,损伤组每组增加2个样本。在前期测序结果的基础上,筛选出non-AREs mRNAs和AREs-mRNAs各五个,利用RT-qPCR技术检测其表达量,并分别计算mRNA在同一时间点内不同个体间的CV,DFA,STD,Z.SCORE。利用T检验、Fisher判别分析和随机森林分类验证有、无AREs mRNA的表达异质性是否存在差异;通过计算mRNA损伤时间组间CV的变异系数(CV’CV)和non-AREs mRNAs及AREs-mRNAs CV’CV的组内均值(Mean CV’CV)以及对CV赋分评估有、无AREs两组的异质性高低。结果:实验组的CV,DFA,STD的Fisher判别分析和随机森林分类均能较为准确的区分non-AREs mRNAs和AREs-mRNAs,T检验结果显示两组间存在显著差异。Non-AREs mRNAs Mean CV’CV显著低于AREs-mRNAs,证明non-AREs mRNAs表达异质性低于AREs-mRNAs。随机抽样组上述分析显示,较实验组而言,两组间差异性降低,CV’CV和Mean CV’CV值相较于实验组均增大。样本增多组CV,DFA,STD的Fisher判别分析、随机森林分类能较为清晰的区分non-AREs mRNAs和AREs-mRNAs,T检验证明有、无AREs组别间存在显著差异。Non-AREs mRNAs的Mean CV’CV仍低于AREs-mRNAs。结论:AREs-mRNAs与non-AREs mRNAs表达异质性存在显著差异,non-AREs mRNAs的表达异质性低于AREs-mRNAs,个体间差异更小,更适用于大鼠骨骼肌损伤时间推断。
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