目的:星形胶质细胞(Astrocyte)在正常的神经活动及中枢的发育再生中具有重要的作用,胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)是星形胶质细胞的标志性蛋白,是一种与脊髓损伤修复密切相关的因子。脊髓损伤后,局部会出现的肥大和增生,细胞伸长,突起增多和增长,这种增生成为反应性胶质增生,这些富含GFAP的胶质瘢痕抑制轴突生长[1],主要通过形成物理的屏障,或者通过改变神经营养因子和轴突生长抑制因子来实现[2]。通过抑制GFAP的表达,可达到抑制星形胶质细胞反应性增生,增加层粘连蛋白(laminin)、细胞外基质( extracellular matrix ,ECM)、粘附分子,从而促进轴突再生。本文主要探讨针对大鼠脊髓损伤关键基因GFAP化学合成的siRNA (si-GFAP-1、si-GFAP-2和si-GFAP-3),能否在体外抑制大鼠星形胶质细胞(Astrocyte) GFAP基因表达,进而筛选出有效的siRNA序列,为进一步研究打下基础。方法:分离SD新生大鼠大脑皮层细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,并以GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。针对大鼠GFAP mRNA化学合成3对21核苷酸(nt) siRNA ,分别以1、2、3 ug/L浓度转染星形胶质细胞,以空白及转染非特异siRNA作为对照,应用RT-PCR检测GFAP mRNA表达,筛选出抑制效率最高的siRNA及其浓度;星形胶质细胞经原代培养,选取生长态势良好的细胞,随机将其分为6组(空白对照、阳性对照、阴性对照、转染3条不同的siRNA各对应一组,分别为si-GFAP-1, si-GFAP-2和si-GFAP-3组),各组分别转染后继续培养12-48小时,分别于12h、24h和48h收集各组细胞,提起RNA,应用RT-PCR检测GFAP基因的表达。