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目的:针对肝癌“毒、瘀、虚”的主要发病机制,采用具有清热活血、健脾补肾作用的叶下珠复方Ⅱ号,探讨其通过上调miR-122表达从而抑制IGF-1R信号通路活化的抗肝癌作用机制,为其临床应用提供新的依据。方法:1.正常肝细胞（L02细胞）与肝癌Huh7细胞miR-122的表达比较采用Q-PCR的方法检测正常肝细胞（L02细胞）与肝癌Huh7细胞中miR-122的表达,比较两者的表达差异。2.叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞miR-122和IGF-1R mRNA表达的影响采用Q-PCR的方法检测叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞中miR-122和IGF-1R mRNA表达的影响,进一步探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝癌的作用机制。3.miR-122表达抑制肝癌Huh7细胞株建立采用反义寡核苷酸技术,针对Huh7细胞上的miR-122序列,通过碱基互补配对原则合成miR-122的反义序列,结合于靶基因上,从而抑制miR-122的表达。用构建好的AMO-miR-122病毒感染肝癌Huh7细胞,经过筛选获得稳定细胞株,然后通过QRT-PCR的方法检测miR-122的表达,Western blot检测miR-122的靶基因IGF-1R蛋白的表达以确证miR-122表达抑制肝癌Huh7细胞株（anti-mmiR-122-Huh7）构建成功。4.叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞和anti-miR-122-Huh7细胞增殖的影响采用MTT法观察不同浓度的叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞、anti-miR-122肝癌Huh7细胞增殖抑制作用效果,同时计算出药物的IC50（半数抑制浓度）。分别设置对照组、叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组（3.0、1.5mg/ml）,每组设置3个复孔,于24h、48h观察药物对肝癌Huh7细胞、anti-miR-122肝癌Huh7细胞增殖的抑制作用。5.叶下珠复方Ⅱ号对anti-miR-122-Huh7细胞凋亡的影响设置对照组、叶下珠复方ⅡI号高、低剂量组（3.0、1.5mg/ml）,每组设置3个复孔,通过Annexin V-FITC/PI流式细胞技术检测叶下珠复方Ⅱ号作用下anti-miR-122肝癌Huh7细胞调亡情况,探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝癌的作用机制。6.叶下珠复方Ⅱ号对anti-miR-122肝癌Huh7细胞miR-122及上游转录因子C/EBPα、下游IGF-1R信号通路基因mRNA表达的影响设置对照组、叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组（3.0、1.5mg/ml）,每组设置3个复孔。采用Q-PCR的方法检测叶下珠复方Ⅱ号对anti-miR-122-Huh7细胞miR-122及上游转录因子C/EBPα、下游IGF-1R信号通路基因IGF-1R、AKT3、KRAS和CyclinG1 mRNA表达的影响,探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝癌的作用机制。7.叶下珠复方Ⅱ号对anti-miR-122-Huh7细胞miR-122上游转录因子C/EBPα、下游IGF-1R信号通路基因蛋白表达的影响设置对照组、叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组（3.0、1.5mg/ml）,每组设置3个复孔。采用Western blot的方法检测叶下珠复方Ⅱ号对anti-miR-122肝癌Huh7细胞miR-122上游转录因子C/EBPα、下游IGF-1R信号通路基因IGF-1R、AKT3、KRAS、ERK1和CyclinG1蛋白表达的影响,探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝癌的作用机制。结果:1.与正常肝细胞（L02）相比,肝癌Huh7细胞中miR-122的表达显著下调（P<0.05）。2.叶下珠复方Ⅱ号作用于肝癌Huh7细胞后,可以显著上调miR-122的表达（P<0.05）,并下调IGF-1R mRNA的表达（P<0.05）。3.转染了 AMO-miR-122病毒的Huh7细胞较肝癌Huh7细胞中基因miR-122的表达显著下降（P<0.05）,IGF-1R显著升高（P<0.05）,可知反义寡核苷酸技术抑制了肝癌Huh7细胞上的miR-122表达,故miR-122表达抑制肝癌Huh7细胞构建成功。4.叶下珠复方Ⅱ号作用于anti-miR-122肝癌Huh7细胞的半数抑制浓度为5.527mg/ml;作用于肝癌Huh7细胞的半数抑制浓度为3.410mg/ml。叶下珠复方Ⅱ号可抑制anti-miR-122肝癌Huh7细胞的增殖,且高剂量组与低剂量组相比,抑制效果显著,具有显著性意义（P<0.05）;与对照组相比,叶下珠复方Ⅱ号对anti-miR-122肝癌Huh7细胞的抑制效果较Huh7细胞的更为明显,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.与对照组相比,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组作用anti-miR-122肝癌Huh7细胞后,晚期凋亡率和总凋亡率均显著升高（P<0.05）,表明叶下珠复方Ⅱ号可促进anti-miR-122-Huh7 细胞凋亡。6.与对照组相比,叶下珠复方Ⅱ号作用于anti-miR-122肝癌Huh7细胞后可上调其miR-122的表达,并下调miR-122靶基因IGF-1R的mRNA表达,以高剂量组尤为显著（P<0.05）;与对照组相比,C/EBPα基因的mRNA表达上调（P<0.05）,AKT3、KRAS和CyclinGl基因的mRNA表达均显著下调,高剂量组尤为显著（P<0.05）。7.与对照组相比,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组可上调C/EBPα的蛋白表达,同时使得IGF-1R、AKT3、KRAS、ERK1蛋白表达下调。结论:1.叶下珠复方Ⅱ号可通过提高miR-122的表达,抑制IGF-1R信号通路活化,从而抑制肝癌Huh7细胞增值,促进其凋亡。2.通过反义寡核苷酸技术抑制miR-122表达后,anti-miR-122肝癌Huh7细胞的增殖显著增加,进一步证实miR-122的表达抑制促进肝癌的发生和发展。3.叶下珠复方Ⅱ号能有效抑制anti-miR-122肝癌huh7细胞增殖,可能与通过提高转录因子C/EBPα的表达、进而促进miR-122表达和抑制IGF-1R信号通路活化有关。