耐辐射奇球菌CPDase结构与功能的研究

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耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)最显著的特征是其对于电离辐射具有较高的抗性,能够忍受较其它细菌高200倍的辐射剂量并且生活力不受影响。近年来的研究多聚焦在耐辐射奇球菌所具有的高效DNA损伤修复系统,然而关于其RNA代谢的具体过程却罕见报道。2’,3’-环磷酸二酯酶(2′,3′-cyclic phosphodiesterase,CPDase)同源物存在于从细菌到哺乳动物几乎所有的生物中,参与了多种RNA和核苷酸的代谢过程。耐辐射奇球菌具有一个编码CPDase的基因dr CPDase,即dr2339。我们首先成功的构建了dr CPDase缺失的突变株,发现其在正常条件下的生长变得迟缓。相较于耐辐射奇球菌野生型菌株R1,Δdr CPDase突变株在受到γ-射线、UV辐射、H2O2和MMC等DNA损伤因子胁迫后其生存率明显下降。通过使用RT-PCR的方法我们发现dr CPDase的转录水平在细胞受到H2O2的胁迫处理之后被诱导上调。同时,额外的单磷酸核苷酸能够部分补偿dr CPDase突变株的表型。此外,我们使用大肠杆菌原核表达系统成功纯化得到了高纯度的dr CPDase蛋白,并通过结晶条件的筛选和优化获得了dr CPDase蛋白的晶体,在上海同步辐射光源收集到了分辨率为1.6?的X射线晶体衍射数据。使用分子置换的方法,我们最终解析、建模得到了dr CPDase蛋白的分子构象,对其结构的分析表明该蛋白在没有底物结合的情况下拥有一个开放的构象,且具有该家族蛋白保守的催化机制。综上,本研究的结果表明dr CPDase与耐辐射奇球菌的极端耐受性有关,并极有可能参与了损伤核苷酸的解毒过程。dr CPDase蛋白结构的解析有助于我们未来进一步了解其生物化学特性及其作用机制。
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