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目的探讨应用表观遗传学方法检测孕妇血浆中胎儿游离DNA水平的应用价值。检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的含量与非妊娠育龄妇女进行比较，有助于不依赖胎儿性别的表观遗传学标志进行产前诊断的研究；对不同孕期的孕妇血浆中胎儿游离DNA水平的比较则可能为非创伤性产前诊断提供新的思路和资料，弥补遗传基因标志物的不足，有利于向临床的推广应用。方法随机选择60例经产前检查的健康孕妇，早期妊娠、中期妊娠及晚期妊娠各20例，妊娠的诊断标准及分期标准参照第六版《妇产科学》。另选择20例经健康体检确定为非妊娠的育龄妇女为对照组。用抗凝试管各抽取研究对象空腹外周血3ml，离心取血浆。用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取母体血浆中总的游离DNA。采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测各组血浆标本中目的基因m-maspin（一种肿瘤抑制基因启动子的甲基化序列）、u-maspin（前者的未甲基化序列，作为胎儿游离DNA的标志）及内参照β-actin基因的表达，读取Ct值（cycle threshold）。将妊娠组和对照组Ct值样本均数进行统计学分析，若差异具有统计学意义（P＜0.01），再运用2-△△Ct公式法进行相对定量，即妊娠各期的孕妇血浆中胎儿游离DNA相对的倍数。结果1．孕妇血浆中DNA的纯度：用QIAamp DNA Blood Mini Kit抽提的孕妇外周血浆中游离DNA，采用紫外分光光度计进行纯度测定，绝大多数标本的DNA纯度较高，A260／A280比值在1.6～1.8之间。2．普通PCR扩增内参照基因β-actin和目的基因m-maspin、u-maspin的琼脂糖电泳结果：β-actin的扩增产物为101bp，m-maspin和u-maspin的扩增产物为98bp，无引物二聚体，无杂带，设计的PCR引物特异性好。3．荧光定量PCR结果：1)该检测系统的特异性达100％，20例非妊娠妇女血浆中均未检测到u-maspin基因的表达；敏感性达95％，60例孕妇血浆中有57例可以检测到胎儿游离DNA。2) m-maspin在母体血浆中水平的检测：妊娠各组和对照组样本均数进行两样本间的t检验，差别无统计学意义（P＞0.05）。妊娠早、中、晚期及非妊娠的样本均数间进行q检验，差别均无统计学意义（P＞0.05），可认为m-maspin在孕妇血浆中的DNA水平与正常非妊娠妇女无明显差异，不是妊娠特异性的标志物。3) u-maspin在母体血浆中水平的检测：u-maspin在正常非妊娠妇女血浆中未能检测到，在孕妇血浆中的浓度随妊娠进展表现出升高趋势，妊娠早、中、晚期的样本均数间进行q检验，有统计学意义（P＜0.01）。说明u-maspin在母体血浆中的水平与妊娠有关，为妊娠特异性的标志物。结论孕妇血浆中存在胎儿游离DNA，晚期妊娠孕妇胎儿游离DNA水平明显高于妊娠早、中期的正常孕妇。母体和胎儿来源的血浆游离DNA可通过胎盘组织特异性表达基因maspin启动子CpG岛甲基化程度区分开来。u-maspin基因可作为孕妇血浆中胎儿游离DNA水平变化的表观遗传学标志，相对于胎儿性别基因作为遗传学标志的检测方法，有助于扩大非创伤性产前诊断的临床应用范围。