当归多糖对点带石斑鱼头肾白细胞免疫活性、免疫相关基因及蛋白表达的影响

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本试验以点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)为试验对象,通过体外孵育的方式研究去蛋白前后当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide)对点带石斑鱼头肾白细胞免疫活性影响、TLR22及其通路相关基因的表达分析及去蛋白前当归粗多糖对点带石斑鱼头肾白细胞的蛋白表达的影响。取30条健康的点带石斑鱼,随机分成3组。并解剖取出头肾后分离得到头肾白细胞,用不同浓度的(200、400、800、1600、3200、6400μg/m L)当归多糖孵育点带石斑鱼头肾白细胞后测定其细胞增殖、呼吸爆发及杀菌能力。结果表明:当归粗多糖、当归多糖均可显著提高点带石斑鱼头肾白细胞的细胞增殖活力、呼吸爆发活力及显著增强细胞杀菌能力。另取30条健康的鱼,随机分成3组。以当归多糖体外孵育点带石斑鱼头肾白细胞,利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测不同时间点(3 h、6 h、12 h、24h、48 h)TLR22信号通路相关基因mRNA相对表达量的变化。结果显示:当归粗多糖、当归多糖均显著影响点带石斑鱼TLR22及通路上相关基因的表达量,并随着孵育时间的延长,基因的表达量均有显著变化。另取45条健康的点带石斑鱼,随机分成3组。并解剖鱼体取出头肾后分离得到头肾白细胞,用孵育浓度为800μg/mL的当归粗多糖孵育点带石斑鱼头肾白细胞24 h,使用iTRAQ技术检测当归粗多糖对点带石斑鱼头肾白细胞的蛋白表达情况,结果表明:经当归粗多糖孵育点带石斑鱼头肾白细胞24 h后,使用iTRAQ技术共鉴定到1301个蛋白,其中1290个蛋白可以进行定量,定量结果发现存在显著差异的蛋白数为63,其中显著上调的差异蛋白数为24,显著下调的差异蛋白数为39;对所有鉴定蛋白和显著性差异蛋白质进行GO、COG、Pathway分析等功能注释,并对所有显著性差异蛋白进行表达量层次聚类分析以及GO富集,Pathway富集分析。
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