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本研究建立了牛地方流行性白血病病毒(BLV)、牛传染性鼻气管炎病毒(BHV1)、牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVDV)和赤羽病病毒(AKV)各种病毒单一的PCR检测方法，分别扩增BLV gp51基因341bp的片段、BHV1 gB基因478bp的片段、BHV1 gE基因271bp片段、AKV S RNA365bp片段和BVDV的UTR基因289bp的片段。
考虑到BLV通常都以前病毒(DNA病毒)的形式整合于宿主细胞的情况，本研究建立了BLV前病毒和BHV1同步PCR检测方法，同步扩增BLV gp51基因341bp的片段和BHV1 gB基因478bp的片段。
本研究建立了BVDV和AKV两种RNA病毒同步PCR检测方法，分别选取AKV和BVDV特异性引物AKVf1/AKVrl和BVDVf1/BVDVr1，建立两种RNA病毒同步RT-PCR反应体系，可以同步扩增AKV基因的365bp的片段和BVDV的UTR基因289bp的片段。根据BLV高度保守的gp51基因序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针，建立并优化反应体系，该方法与AKV、BVDV、IBR等均无交叉反应，在对已知拷贝数的含BLV质粒的扩增中，其检测灵敏度达到260个拷贝/μL，比用常规PCR对相同模板进行扩增的灵敏度高1000倍。本方法简便、快速，从核酸提取到获得结果只需3h。构建了含牛地方流行性白血病病毒(BLV)、牛传染性鼻气管炎病毒(BHV1)、牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVDV)和赤羽病病毒(AKV)四种病毒相关基因的载体质粒作为病毒DNA或RNA阳性对照，研制了牛地方流行性白血病病毒(BLV)、牛传染性鼻气管炎病毒( BHV1)、牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVDV)和赤羽病病毒(AKV)各种单一病毒的PCR检测试剂盒，以及BLV前病毒和BHV1二重PCR检测试剂盒和AKV和BVDV单管二重RT-PCR检测试剂盒。对试剂盒的重复性结果表明，各个试剂盒重复性较好，但反复冻融会有所影响，因此推荐开启后尽快一次用完。保存期试验结果表明，试剂盒在-20℃能保存六个月，稳定性较好，能满足实际检测的需求。用建立的PCR检测方法对国内采集和进境奶牛的520份血凝块样品和4份全血样品进行4种病毒检测，检出2头BHV1 gB阳性，1份经ELISA检测为BVDV阳性的样品验证为PCR阳性。编制的SN/T1918-2007《牛传染性鼻气管炎聚合酶链反应操作规程》和SN/T1917-2007《牛地方流行性白血病聚合酶链反应操作规程》已发布。