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喹赛多为喹喔啉类抗菌促生长新药,对猪、牛、鸡等有明显的促生长作用,但目前对其促生长机制还不清楚。本文运用相对定量RT-PCR方法,研究喹赛多对原代培养猪肝细胞以及仔猪肝脏组织中胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)和表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)mRNA表达的影响,探讨喹赛多抗菌促生长的机理。 猪肝细胞的原代培养采用Seglen建立的两步灌注酶消化法并稍加改进(Seglen,1976)。将分离的猪肝细胞按5×10~5/孔接种于24孔培养板,每孔加培养液900μL,放入37℃5%二氧化碳培养箱中培养,待细胞80%汇合后,分别加入PBS100μL、生长激素100μL、喹赛多100μL,分成PBS组、生长激素(0.01ng/mL、0.1ng/mL、1.0ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)组、喹赛多(50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL、800ng/mL)组,继续培养48h,提取细胞总RNA。另取一块24孔培养板,按上述接种方法培养肝细胞48h后,分别按生长激素100ng/mL、喹赛多400ng/mL添加于培养液中,PBS对照组加入等体积的PBS,于4h、8h、12h、24h、48h提取细胞总RNA。将以上总RNA进行反转录PCR。反转录产物用1%琼脂糖凝胶分离后,用SYNGENE凝胶成像系统分析目的条带的相对灰度值。以上各组均取3孔做细胞计数,观察药物对细胞增殖情况的影响。结果表明,喹赛多按200ng/mL添加于原代培养猪肝细胞中可显著提高其IGF-1 mRNA表达(P<0.05),而该浓度喹赛多对EGF mRNA表达无显著影响(P>0.05);喹赛多400ng/mL、800ng/mL对IGF-1mRNA和EGF mRNA表达均有显著影响(P<0.05),但二剂量组间均无显著性差异(P>0.05)。喹赛多以400ng/mL添加于原代培养的猪肝细胞8h就可显著提高EGFmRNA表达(P<0.05),而此时对IGF-1 mRNA表达无显著影响(P>0.05);12h,24h,48h均可显著提高IGF-1 mRNA和EGF mRNA的表达(P<0.05)。细胞计数的结果表明,喹赛多对肝细胞的增殖无明显影响。