β-地中海贫血（β-Thalassemia）是由于人类β珠蛋白基因发生突变,以致用以合成血红蛋白的β珠蛋白肽链合成减少或者完全不能合成,导致红细胞内α珠蛋白肽链和β珠蛋白肽链比率失衡,使得红细胞溶解速率加快的一种遗传性溶血性血红蛋白病。目前,只有极少数患者进行与之相匹配的造血干细胞移植才能获得有效治疗,大多数病患只能通过输血治疗来减缓病程的发展,但易造成铁超载而使得机体脏器及内分泌腺等严重受损。β-地中海贫血生理病理机制和临床治疗新疗法的推进亟需一个理想的、能准确模拟β-地中海贫血病因和临床症状同时可以进行体内试验的动物模型。CRISPR/Cas9技术是目前流行的定向编辑基因技术,具有简单、高效、低成本的优点,在构建基因突变动物模型方面具有重要作用。本文运用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除食蟹猴HBB基因编码区,导致HBB基因表达异常,以致β珠蛋白肽链的生成缺陷来构建β-地中海贫血疾病食蟹猴模型。本论文的设计、实验内容和结果如下。1.设计并构建载体。设计靶向食蟹猴HBB基因第二外显子的3个sg RNA,体外转录,制备载体。2.食蟹猴胚胎上验证3个sg RNA的效率和培育HBB敲除食蟹猴。将制备好的载体显微注射入食蟹猴胚胎中,体外培养7天后获得囊胚。收集10枚囊胚进行T7E1酶切及测序,显示胚胎80%（8/10）被Cas9核酸酶靶向切割。而后通过胚胎移植获得一只新生仔猴,命名为KO猴,采集其血液及耳朵组织进行测序,发现在HBB基因第二外显子同一位点都发生217 bp的缺失。3.KO猴表型分析。（1）在出生后至8月龄,对其血液学检测发现血红蛋白水平、红细胞数目、红细胞压积等含量随着发育逐渐降低,并较对照组约低50%。（2）血涂片表明,其已出现β-地中海贫血典型红细胞特征,如靶形、棘形、水滴形、破碎状等红细胞。（3）血红蛋白电泳结合q PCR结果发现,其β珠蛋白出现生成缺陷,对照组β珠蛋白相对其含量约为105倍。（4）形态特征分析发现其皮肤及耳朵较为苍白、无血色,皮毛较为苍黄杂乱。（5）生长曲线表明其生长发育较缓慢,在8月龄时更为明显,其体重较对照组约降低30%。（6）脾脏及肝脏B超结果发现,其脾脏组织密度增大,较对照组平均厚度增2.6 mm,是其1.43倍,较对照组平均长度增6.45 mm,是其1.23倍。其肝右叶最大斜径增加4.56 mm,是对照组1.18倍,说明其肝脏及脾脏发生肿大,同时脾脏伴有纤维性增生。（7）分析行为学活动发现其活动能力较弱,其不活跃行为的平均时长约是对照组的3.57倍,对照组探索行为的平均时长约是其的1.63倍,并且随着年龄的增长,该KO猴开始出现仰躺、趴伏、突然倒趴等特殊行为活动。综合以上实验结果,本实验成功研制了重症β-地中海贫血疾病的食蟹猴动物模型,为β-地中海贫血疾病基础研究和临床前研究的创新发展提供更佳的动物模型。