塞尼卡病毒（Senecavirus A,SVA）属于小核糖核酸病毒科（Picornaviridae）Senecavirus病毒属成员,为单股正链不分节的RNA病毒,其临诊特征为病猪鼻镜和蹄部发生水疱、溃烂等,严重者会死亡,该病严重危害养殖业的发展。本研究主要收集广东省里某养殖场的发病猪病料,参照NCBI上公布的SVA序列设计特异引物,采用RT-PCR方法鉴定病料,利用PK-15细胞分离病毒,分离株经Taq Man荧光定量RT-PCR方法、间接免疫荧光试验（IFA）和RT-PCR方法以鉴定。此外,对分离株进一步测定半数组织培养感染剂量(TCID50)。结果显示细胞接种经过盲传3代后,出现了明显的病变,证明成功分离获得SVA分离株,且分离株在PK-15细胞上的TCID50为10-5.8。此外,根据Gen Bank中公布的SVA VP1基因序列,序列比对后设计一对特异引物,通过RT-PCR方法扩增后克隆连接至p MD-18T载体上,通过测序后进行同源性分析和遗传进化树分析。结果显示扩增的VP1基因长度为894 bp,序列比对结果显示该分离株和其他地区分离株VP1基因同源性在92.3%～97.5%之间,与广东分离株（KT321458.1、KX751946.1）序列亲缘关系最近,同源性相似度最高。与美国分离株（KU954086.1、KY618837.1）和泰国分离株（MF416219.1、KY368744.1）亲缘关系最远。可以发现VP1基因序列的变异性不高。本文研究中还建立了基于SVA保守区域的实时逆转录环介导等温扩增（real-time RT-LAMP）检测方法,从NCBI下载多条序列,利用Megalign比对分析后,挑选保守序列,设计LAMP引物进行real-time RT-LAMP试验并筛选合适引物。经过前期条件摸索优化和特异性试验,并通过对RT-PCR方法、real-time RT-PCR方法与real-time RT-LAMP方法敏感性做对比,对临床样品进行了检测。结果表明,最佳条件为63℃恒温扩增60 min,建立的方法具有较好特异性;real-time RT-LAMP方法显示最低检测值为10 copies/μL,比RT-PCR方法高出100倍,比real-time RT-PCR方法高出10倍。检测35份临床样本的比较结果显示,real-time RT-LAMP方法检出阳性样品为16份。与RT-PCR方法和real-time RT-PCR方法阳性检出数一致,证明该方法可用于现场检测,且效果良好,具有应用前景。此外,本文的研究中还纯化了SVA VP1蛋白用于免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体。将VP1蛋白免疫后的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞（SP2/0）进行细胞融合,利用构建的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,利用有限稀释法进行亚克隆后获得4株可稳定分泌抗VP1蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞,分别命名为#11、#14、#16和#33。IFA试验和Western-blot试验结果显示,4株单克隆抗体均可与SVA发生免疫反应,单克隆抗体亚型分析可知#11、#14和#33为重链lg G1,#16为重链lg G2a,所有轻链为Kappa链。用水泡性口炎病毒（VSV）、猪水疱病病毒（SVDV）和口蹄疫病毒（FMDV）蛋白验证特异性,结果显示特异性良好,没有产生交叉反应,效价分析结果显示#11为1:51200,#14为1:12800,#16为1:204800,#33为1:6400。得到的4株单克隆抗体可以为VP1结构功能研究和SVA的诊断研究提供相关依据和物质基础。