【摘 要】
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目的无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）,也称之为B族链球菌（Group B streptococcus,GBS）,是一种条件致病菌,可在各个年龄段致病,尤其可引发新生儿脑膜炎、败血症等严重感染。为试图寻找苏州地区左氧氟沙星耐药无乳链球菌的分子特征,本研究通过分析2018-2019年临床分离无乳链球菌的耐药性分布、耐药基因、血清型、多位点序列分型以及蛋白质谱学特征,探究相
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目的无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）,也称之为B族链球菌（Group B streptococcus,GBS）,是一种条件致病菌,可在各个年龄段致病,尤其可引发新生儿脑膜炎、败血症等严重感染。为试图寻找苏州地区左氧氟沙星耐药无乳链球菌的分子特征,本研究通过分析2018-2019年临床分离无乳链球菌的耐药性分布、耐药基因、血清型、多位点序列分型以及蛋白质谱学特征,探究相互之间的关系。并探讨蛋白质谱特征峰用于左氧氟沙星耐药菌株临床快速诊断的价值,为今后更好地指导临床精准抗感染治疗奠定基础。方法收集2018年1月至2019年1月临床分离的132株无乳链球菌菌株,进行药敏试验判读其耐药性和耐药表型;采用PCR法及基因测序方法检测gyr A、par C和par E基因突变、细菌血清型以及多位点序列分型;质谱法检测收集左氧氟沙星耐药菌株的蛋白质谱峰,采用Clin Pro Tools 3.0软件对左氧氟沙星耐药菌株蛋白质谱特征峰进行筛选并验证。结果1.苏州地区无乳链球菌的流行病学特征:临床分离的无乳链球菌最主要来源是生殖道培养标本;回顾分析2014年至2018年间生殖道培养阳性标本中,无乳链球菌为主要检出病原菌,占比在31.8%～41.5%之间;其耐药性主要体现在红霉素、克林霉素和左氧氟沙星,耐药率依次为62.9%、66.7%、43.9%;对青霉素高度敏感,未检出耐药菌株;血清型以III型最为常见,占比57.6%。2.红霉素及克林霉素耐药结果分析:耐药表型主要为c MLS表型,占比55.3%;耐药基因erm B阳性菌株最为常见;mef A/E阳性菌株较erm B阳性菌株,具有较低水平的红霉素和克林霉素耐药率;c MLS表型菌株中59.4%为单独erm B阳性菌株,所有M表型菌株中均携带mef A/E耐药基因。3.左氧氟沙星耐药结果分析:介导苏州地区无乳链球菌左氧氟沙星耐药的主要机制是由于gyr A基因和par C基因发生突变所致,主要携带gyr A＿Ser81Leu+par C＿Ser79Tyr+par E＿His225Tyr突变,占44.8%,且以血清III型和ST19型为主。4.质谱技术快速鉴别诊断评价:左氧氟沙星耐药菌株蛋白质谱峰分析显示6894,3445,5076,4544以及3721 m/z为主要特征峰,且采用GA算法对预测GBS是否为左氧氟沙星耐药的敏感率达到90.9%,特异性达87.5%。结论苏州地区分离的无乳链球菌是孕产妇生殖道标本培养的主要病原菌,血清学型别主要有Ia,Ib,III,V和VI型5种,其中以III型最为常见。红霉素和克林霉素的耐药率高,耐药表型大部分为c MLS表型且主要表达erm B基因,该耐药模式与国内外报道较为一致。左氧氟沙星的耐药情况与国内报道较为一致,却远高于国外报道,提示我国与其他地区存在较大的流行病学差异。深入研究其分子特征后表明,左氧氟沙星耐药菌株主要携带gyr A＿Ser81Leu+par C＿Ser79Tyr+par E＿His225Tyr突变,以血清III型ST19型为主。此外,筛选获得6894 m/z等质谱特征峰可以用于临床左氧氟沙星耐药菌株的快速鉴别,为今后指导临床合理用药提供依据。
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