硝菔通结方对功能性便秘大鼠胃肠神经递质及AQP3的影响

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目的:观察硝菔通结方对功能性便秘大鼠VIP、5-HT、P物质等胃肠神经递质及AQP3水平的影响,分析硝菔通结方治疗功能性便秘的作用机理。  方法:健康SD大鼠150只,采用复方地芬诺脂灌胃的方法建造功能性便秘模型。造模28天后,空白对照组和FC模型组正常饲养,以生理盐水灌胃;治疗组分别给予高、中、低浓度的硝菔通结方水煎剂灌胃治疗。在治疗的第1周、第2周、第3周分别在各组随机取10只大鼠,收集标本,检测指标。活性炭灌胃记录各组大鼠首粒黑便的排出时间;ELISA检测大鼠血清中P物质、5-HT的水平变化;Q-PCR检测结肠组织中VIP、AQP3mRNA的表达变化;免疫组化法检测结肠组织中VIP、AQP3的表达;Western bolt检测结肠组织内VIP、AQP3蛋白质的表达变化。  结果:①一般情况:硝菔通结方治疗后大鼠神志、毛色、食量、体重、精神状态等与FC模型组比较有明显改善,高、中剂量组长时间治疗效果尤为突出。②首粒黑便排出情况:与空白组比较,FC模型组大鼠第一粒黑便出现时间显著延长(P<0.01);与FC模型组比较,硝菔通结方低、中、高各剂量组大鼠第一粒黑便排出时间均明显缩短(P<0.01)。③排便量:和空白组比较,FC模型组大鼠粪便量减少,其中前两周差异极为明显(P<0.01);和FC模型组比较,治疗组高、中剂量组粪便量明显增多(P<0.01),低剂量组差异不明显(P>0.05)。④粪便含水率:和空白组比较,FC模型组大鼠粪便含水率减少,其中前两周减少极为明显(P<0.01);和FC模型组比较,高、中剂量组粪便含水量增多,其中高剂量组差异极为明显(P<0.01),低剂量组无明显差异。⑤血清5-HT含量:和空白组比较,FC模型组大鼠血清中5-HT含量明显减少(P<0.01);和FC模型组比较,高剂量组5-HT水平有明显改善(P<0.01),第3周中剂量组血清中5-HT水平也有所升高(P<0.05),低剂量组无显著性差异(P>0.05)。⑥血清P物质含量:与空白组比较,FC模型组含量明显减少(P<0.01);与FC模型组比较,硝菔通结方治疗1、2周后,高、中剂量组血清中P物质水平升高,其中高剂量组具有极显著性差异(P<0.01),低剂量组无差异(P>0.05);治疗3周后,各治疗组血清中P物质水平均有升高,其中高、中剂量组差异明显(P<0.01)。⑦结肠VIP表达:和空白组比较,FC模型组大鼠结肠组织VIPmRNA表达明显降低(P<0.01);和FC模型组比较,硝菔通结方高、中剂量组大鼠结肠组织中VIP的mRNA表达升高,其中高剂量组有极显著性差异(P<0.01),硝菔通结低剂量组无差异(P>0.05); VIP蛋白表达与mRNA表达一致。⑧结肠AQP3表达:和空白组比较,FC模型组大鼠结肠组织AQP3的mRNA表达明显降低(P<0.01);和模型组比较,硝菔通结方高、中剂量组大鼠结肠组织中AQP3mRNA表达明显升高(P<0.01),硝菔通结方低剂量组无差异(P>0.05)。AQP3蛋白表达与mRNA表达一致。  结论:硝菔通结方能明显改变功能性便秘大鼠血清中P物质、5-HT的水平,增加结肠组织中VIP、AQP3的mRNA和蛋白的表达水平。提示硝菔通结方可能是通过促进胃肠道动力,改善胃肠道水液代谢,从而达到治疗便秘的作用。
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