【摘 要】
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山柑属植物具有多种生物活性成分,本实验以新疆特色植物爪瓣山柑为原料,采用响应面法对超声波辅助提取爪瓣山柑多糖工艺进行优化,通过超滤和反复冻融的方法对其进行纯化,然后
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山柑属植物具有多种生物活性成分,本实验以新疆特色植物爪瓣山柑为原料,采用响应面法对超声波辅助提取爪瓣山柑多糖工艺进行优化,通过超滤和反复冻融的方法对其进行纯化,然后对纯化后多糖的结构表征和生物活性进行研究。通过单因素实验和响应面法优化超声波辅助提取爪瓣山柑多糖工艺得到最佳提取条件:液料比为25:1,超声功率500W,超声49.5 min,提取温度为72℃。爪瓣山柑粗多糖实际得率为4.437%。通过高效液相色谱法对多糖分子量分布进行初步分析后,使用截流量为3500 D透析袋进行透析,后采用30 kD超滤管进行分离纯化,反复冻融得到了分子量均一的爪瓣山柑多糖CHP-1。根据标准曲线计算出CHP-1的分子量约为1.79×103 kDa。通过对CHP-1的基本成分进行分析,得到结论:CHP-1中总糖含量为93.25%,蛋白质含量0.21%,糖醛酸含量4.41%,硫酸基含量5.42%。气相色谱分析得到CHP-1主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖构成,含有少量的阿拉伯糖、木糖以及鼠李糖。计算可得鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖的摩尔比为为0.33:0.65:0.53:3.15:1:1.51。紫外全波长扫描可以看出在190 nm处有较大吸收峰,说明有多糖特征;在260-280nm处无明显吸收峰,说明蛋白质和核酸含量极低。采用傅里叶红外光谱、核磁共振、高碘酸氧化和Smith降解、甲基化等方法对多糖结构表征进行研究,结果表明CHP-1糖残基连接方式多数为α-构型,同时也存在β-构型;由于多糖分子量大,结构也较为复杂,基于现有实验条件,推测CHP-1糖苷键连接方式是以(1→4)连接的甘露糖主链。经刚果红实验、电子扫描显微镜、DSC对CHP-1进行分析,表明爪瓣山柑多糖CHP-1在弱碱溶液中存在三股螺旋结构,表面结构呈光滑丝状体,交联成网状,刚性较强,具有较高的热稳定性。此外,通过测试对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基清除能力及铁还原力实验来验证爪瓣山柑多糖具有体外抗氧化活性。
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