体外获能马鹿精子酪氨酸磷酸化蛋白的分布与表达

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人及哺乳动物的受精过程是一系列的复杂事件。哺乳动物精子必须在雌性生殖道内经历成熟过程才能获得受精能力,这一现象称为获能(Capacitation)。精子获能是精卵结合的前提,许多因素参与调节精子获能,其中精子蛋白酪氨酸磷酸化是精子运动力、精子超激活运动、精子获能等多种生理生化过程的重要调控因素。精子获能的机理目前还不是十分清楚,但己知酪氨酸蛋白的磷酸化与精子获能相关,本研究的目的是研究酪氨酸磷酸化蛋白在马鹿精子获能过程中的变化。本研究以马鹿精子为研究对象,对体外获能过程中酪氨酸磷酸化的分布和表达规律进行了研究。采用上浮法TALP获能培养基诱导马鹿精子体外获能,以精子与金霉素(CTC)荧光结合类型为指标评价精子获能状态,用免疫荧光技术和Western blot方法检测酪氨酸磷酸化的蛋白在精子上的分布以及酪氨酸磷酸化水平的变化规律。结果显示:随着获能培养的进行,发生蛋白酪氨酸磷酸化的精子的比例增加,并且酪氨酸磷酸化分布由头部扩增至鞭毛,至获能后期几乎所有的精子上都出现酪氨酸磷酸化位点。Western blot在获能前检测到一种分子量为32kDa的酪氨酸磷酸化蛋白,获能后又检测到分子量为55kDa,37kDa,27kDa,80kDa和95kDa的磷酸化酪氨酸蛋白。酪氨酸磷酸化蛋白与马鹿精子获能具有一定的相关性。
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