【摘 要】
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目的:研究槲皮素（quercetin,Que）对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾组织中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α（Phosphorylationalpha-AMP-activated protein kinase,p-AMPKα）蛋白表达及TGF-β1/Smad3信号通路的影响,探究槲皮素在抗肾纤维化过程中可能存在的作用机制。方法:（1
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目的:研究槲皮素（quercetin,Que）对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾组织中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α（Phosphorylationalpha-AMP-activated protein kinase,p-AMPKα）蛋白表达及TGF-β1/Smad3信号通路的影响,探究槲皮素在抗肾纤维化过程中可能存在的作用机制。方法:（1）选取72只体重约200±10g的雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组（S ham组）、模型组（UUO组）、槲皮素治疗组（Que组）,每组24只。（2）Sham组、UUO组、Que组大鼠均进行腹腔内注射麻醉（10%水合氯醛0.3ml/100g）,再持镊子夹住碘伏棉球进行术口消毒,覆盖无菌孔巾,用手术刀在手术部位竖形切开,第一步先切开皮肤,接着切开皮下组织,然后钝性分离肌肉层,再剪开壁腹膜和脏腹膜等各层,使左侧输尿管游离:（1）Sham组大鼠只剥离输尿管,不结扎输尿管;（2）UUO组、Que组大鼠结扎左侧输尿管。（3）Que组以100mg/kg/d槲皮素（用DMSO溶解）,在制模手术前1天给予灌胃,1次/天,给予Sham组和UUO组灌胃等量的0.9%生理盐水。（4）每组在造模后的第3、7、14天末随机分批处死各8只大鼠,把梗阻肾组织取出来,再进行中性甲醛液固定、脱水、石蜡包埋、切片,然后将其行HE、Masson染色,进而用400X光学显微镜观察,免疫组化检测（p-AMPKα、TGF-β1、Smad3）,通过Image-Pr o Plus6.0软件计算平均光密度值（AOD）,再使用SPSS25.0统计学软件进行数据分析。结果:1、HE染色结果:Sham组肾组织没有出现很明显的病理改变,组内3、7、14天差别无统计学意义（P>0.05）;在各相应时间点,UUO组比Sham组TIS稍增高,差异具备统计学意义（P<0.05）;UUO组梗阻第3天时,梗阻肾形态发生改变,肾小管慢慢出现损伤,梗阻7天、14天时,肾小管逐步扩张、有些小管出现萎缩破坏、炎性细胞浸润,肾小管间质损伤评分（TIS）渐渐增高,组内3天、7天、14天差别具备统计学意义（P<0.05）;在各相应时间点,Que组比UUO组TIS稍降低,差异具备统计学意义（P<0.05）。2、Masson染色结果:Sham组间质胶原纤维绿染面积较小,组内3、7、14天差异不具备统计学意义（P>0.05）;在各相应时间点,UUO组比Sham组肾间质纤维化面积比（RIF指数）稍增高,差别具备统计学意义（P<0.05）;UUO组梗阻第3天时,开始出现间质纤维,梗阻7天、14天时,肾间质胶原纤维绿染面积逐步增多,RIF指数逐渐升高,组内3天、7天、14天差别有统计学意义（P<0.05）;在各相应时间点,Que组比UUO组RIF指数有所降低,差别有统计学意义（P<0.05）。3、免疫组化结果:（1）p-AMPKα蛋白主要表达在肾小管上皮细胞胞质及胞核,Sham组p-AMPKα蛋白大量表达,组内3天、7天、14天差异不具备统计学意义（P>0.05）;在各相应时间点,UUO组与Sham组相比,p-AMPKα蛋白的表达减少,差别具备统计学意义（P<0.05）;UUO组大鼠随着梗阻时间延长,p-AMPKα蛋白的表达逐渐减少,UUO组3天、7天、14天差异具备统计学意义（P<0.05）;在各相应时间点,Que组与UUO组相比,p-AMPKα蛋白的表达有所增加,差异具备统计学意义（P<0.05）。（2）TGF-β1蛋白表达主要在肾小管上皮细胞,Smad3蛋白表达主要在肾小管上皮细胞胞质及胞核,Sham组TGF-β1、Smad3蛋白较少表达,组内3天、7天、14天差别无统计学意义（P>0.05）;在各相应时间点,UUO组与Sham组相比,TGF-β1、Smad3蛋白的表达增加,差异具备统计学意义（P<0.05）;UUO组大鼠随着梗阻时间延长,TGF-β1、Smad3蛋白的表达逐渐增加,UUO组3天、7天、14天差别有统计学意义（P<0.05）;在各相应时间点,Que组与UUO组相比,TGF-β1、Smad3蛋白的表达有所减少,差异具备统计学意义（P<0.05）。结论:1.p-AMPKα蛋白表达降低、TGF-β1和Smad3蛋白表达升高,提示AMPK及TGF-β1/Smad3信号通路参与肾间质纤维化过程。2.槲皮素治疗后,p-AMPKα蛋白表达升高,TGF-β1和Smad3蛋白表达降低,说明槲皮素可能激活AMPK,作用于TGF-β1信号通路,抑制Smad3磷酸化,导致Smad3表达下降,从而减轻肾纤维化。
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