随着转基因作物商业化生产以来,种植面积不断扩大,关于转基因食品的生物安全性争议成为热点问题,受到国内外的广泛关注。转基因玉米是最早获得商业化种植的转基因作物之一,也是世界上种植面积最大的转基因经济、粮食作物。玉米作为我国的主要粮食之一,同时也是研究较多的模式植物。本文以转cry1Ab和epsps基因抗虫耐除草剂玉米为材料,通过确定该转基因玉米的外源插入片段全序列、插入位点、侧翼序列和拷贝数等信息,为转基因玉米的安全评价提供分子特征方面的依据。研究结果表明:1.明确了转cry1Ab和epsps基因抗虫耐除草剂玉米的分子特征信息(1)通过常规PCR技术,对插入元件进行检测。基于长链PCR原理,利用高保真酶对插入片段侧翼序列进行测定。经PCR扩增和测序结果分析,确定了插入序列的全长为12499 bp,转入序列插入于玉米Chr01染色体,第271,871,046位点上。(2)利用Southern bloting和微流滴数字PCR两种方法对转基因抗虫耐除草剂玉米外源插入序列的拷贝数进行测定,确定了目的基因为单拷贝。2.建立了转cry1Ab和epsps基因抗虫耐除草剂玉米的转化体特异性定性PCR方法以转化体特异性序列为靶标,设计了特异性引物,并对特异性、反应体系、反应程序进行了优化和确定。主要为:(1)采用常规PCR方法,确定了转cry1Ab和epsps基因抗虫耐除草剂玉米特异性引物,上游引物为5’-CAGTACTAAAATCCAGATCCCCCGA-3’,下游引物为5’-CAGACGACGGTCCGCTAA-3’,预期扩增片段大小为259 bp。(2)采用常规PCR方法,确定了最合适的引物浓度为0.4μmol/L,退火温度为58℃。(3)采用常规PCR方法,确定了特异性良好的检测方法,检出限为0.1%,满足转基因生物安全检测监管的需求。