【摘 要】
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目的:结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,也是全球第二大癌症相关死亡原因。越来越多的研究显示,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）在结直肠癌的发生和发展中起着重要的调控作用。CASC9作为近年新发现的lnc RNA,已经被证实在多种恶性肿瘤中起致癌作用,但其在结直肠癌中的作用及机制的相关研究较少。本研究旨在探索CASC9在结直肠癌肿瘤组织和细胞系中的表达水平及其与
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目的:结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,也是全球第二大癌症相关死亡原因。越来越多的研究显示,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）在结直肠癌的发生和发展中起着重要的调控作用。CASC9作为近年新发现的lnc RNA,已经被证实在多种恶性肿瘤中起致癌作用,但其在结直肠癌中的作用及机制的相关研究较少。本研究旨在探索CASC9在结直肠癌肿瘤组织和细胞系中的表达水平及其与临床病理特征之间的联系,并在体外实验中验证CASC9在结直肠癌细胞中的功能及作用机制,为结直肠癌的临床治疗提供重要的分子靶点。方法:收集50对配对的结直肠癌肿瘤组织及邻近正常组织,用实时荧光定量PCR技术检测CASC9的表达水平,统计并分析CASC9表达水平与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系。对五种结直肠癌细胞系及正常结肠上皮细胞进行体外培养,检测CASC9的表达水平,选取表达水平更高的两株细胞系作为研究对象。设计靶向CASC9的si RNA对结直肠癌细胞系进行转染,用CCK8实验、细胞克隆形成实验和Ed U细胞增殖实验检测结直肠癌细胞的增殖能力。通过核质RNA分离实验和实时荧光定量PCR技术检测CASC9在结直肠癌细胞核和细胞质中的相对表达水平。利用生物信息学网站star Base v2.0预测CASC9与mi R-576-5p及mi R-576-5p与AKT3之间的潜在结合位点和相关性,并采用双荧光素酶报告实验和实时荧光定量PCR验证它们之间的靶向结合关系和相关性。在结直肠癌细胞系中,通过下调CASC9和（或）mi R-576-5p的表达,检测细胞的增殖能力和AKT3蛋白的表达水平,以验证三者之间的关系及其对结直肠癌细胞增殖能力的影响。结果:实时荧光定量PCR检测结果表明,与邻近正常结直肠组织和正常结肠上皮细胞系相比,CASC9在结直肠癌肿瘤组织和细胞系中的表达水平明显升高（P<0.05）,且其异常表达与结直肠癌的临床分期有关（P<0.05）。选取HT29和SW620细胞进行体外实验,细胞增殖实验结果表明,干扰CASC9的表达有效抑制了结直肠癌细胞的增殖（P<0.05）。核质RNA分离和实时荧光定量PCR结果显示,CASC9主要存在于结直肠癌细胞的细胞质中（P<0.05）。由生物信息学网站预测和实验验证可知,mi R-576-5p分别与CASC9和AKT3的3’-非编码区存在结合位点,且其表达在结直肠癌组织中分别与CASC9和AKT3呈负相关。此外,AKT3被证明是mi R-576-5p的下游靶基因,且受mi R-576-5p的负性调控。CCK8和蛋白印迹实验表明,mi R-576-5p的下调解除了CASC9沉默对结直肠癌细胞增殖的抑制作用,并使CASC9沉默引起的AKT3表达水平降低这一结果被逆转。结论及意义:CASC9是结直肠癌的一种致癌因子,其可作为mi R-576-5p的竞争性内源RNA,间接调控AKT3的表达,从而促进结直肠癌细胞的增殖。该分子机制可能会为结直肠癌的分子靶向治疗提供新思路。
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