【摘 要】
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目的:帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是最常见的中枢神经系统退行性疾病之一。长链非编码RNA（lnc RNA）-核富含丰富的转录本1（Nuclear-enriched abundant transcript1,NEAT1）在哺乳动物脑内含量非常丰富;通过本研究,探讨在1-甲基-4-苯基吡（1-Methyl-4-phenylpyridine,MPP+）诱导的PD细胞模型中ln
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目的:帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是最常见的中枢神经系统退行性疾病之一。长链非编码RNA（lnc RNA）-核富含丰富的转录本1（Nuclear-enriched abundant transcript1,NEAT1）在哺乳动物脑内含量非常丰富;通过本研究,探讨在1-甲基-4-苯基吡（1-Methyl-4-phenylpyridine,MPP+）诱导的PD细胞模型中lnc RNA NEAT1对凋亡方面的影响,从而研究lnc RNA NEAT1在PD发病机制中的作用。方法:用不同浓度（0m M、0.25m M、0.5m M、0.75m M、1m M和1.25m M,1m M=1mmol/L）MPP+诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型,应用CCK-8试剂盒检测SH-SY5Y细胞的存活率确定最佳MPP+浓度。设置对照与PD组,实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测两组lnc RNA NEAT1、微小RNA-132-3p（mi R-132-3p）的含量。免疫印迹法（Western blot,WB）检测两组叉形头转录因子（FOXO3a）、Bim、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase 3）的表达含量;利用慢病毒转染的技术转染SH-SY5Y细胞空载病毒（sh-NC）、携带敲低lnc RNA NEAT1基因病毒（sh-NEAT1）,并分别测定lnc RNA NEAT1的含量来评价lnc RNA NEAT1是否得到有效敲低,进一步对上述细胞进行MPP+药物处理并将细胞分为:对照组,sh-NC组、sh-NC+MPP+组、sh-NEAT1+MPP+组,通过qRT-PCR检测各组mi R-132-3p的含量,通过WB检测各组凋亡相关蛋白含量。结果:1.随着MPP+浓度的逐渐增加,细胞的存活率逐渐下降（P<0.05）。在1mmol/L浓度时细胞存活率下降,细胞毒性作用明显,故后续实验采用1mmol/L浓度的MPP+诱导建立PD细胞模型。2.qRT-PCR结果可见:1)与对照组相比,MPP+组lnc RNA NEAT1的含量显著增多（P<0.01）,mi R-132-3p的含量显著下降（P<0.01）;2)sh-NEAT1处理的SH-SY5Y细胞中lnc RNA NEAT1的含量比sh-NC处理的细胞明显减少,说明细胞中的lnc RNA NEAT1被成功敲低。3)与sh-NC+MPP+组比较,sh-NEAT1+MPP+组mi R-132-3p的含量显著上升（P<0.01）;3.WB结果显示:1)与对照组相比,MPP+组的FOXO3a、Bim、caspase 3的蛋白相对表达量增加（P<0.01）;2)与sh-NC+MPP+组比较,sh-NEAT1+MPP+组的FOXO3a、Bim、caspase 3蛋白表达降低,差异有统计学意义（P<0.01）;3)sh-NC组和对照组细胞模型中FOXO3a、Bim、caspase 3蛋白表达水平相仿,结果无显著差异（P>0.05）。4.荧光素酶成像显示lnc RNA NEAT1与mi R-132-3p具有靶向关系。结论:LncRNA NEAT1在PD中表达上调,抑制lnc RNA NEAT1的表达可抑制细胞凋亡,减少PD中细胞的损伤,起到保护作用。而lnc RNA NEAT1对凋亡的调节可能通过mi R-132-3p/FOXO3a/Bim/caspase 3信号通路实现,为缓解和治疗PD提供了新的策略和潜在的可能性。
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