【摘 要】
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目的:Nicotiflorin是睡莲花的主要成分之一,具有抗炎、镇痛和神经保护的作用。通过分子对接显示,Nicotiflorin与肾脏组织中的差异表达蛋白具有相互作用的位点,但Nicotiflorin对急性肾损伤（Acute Kidney Injury,AKI）的影响尚不清楚。本研究旨在探究Nicotiflorin对缺血再灌注（Ischemia/Reperfusion,I/R）诱导的AKI的影响及
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目的:Nicotiflorin是睡莲花的主要成分之一,具有抗炎、镇痛和神经保护的作用。通过分子对接显示,Nicotiflorin与肾脏组织中的差异表达蛋白具有相互作用的位点,但Nicotiflorin对急性肾损伤（Acute Kidney Injury,AKI）的影响尚不清楚。本研究旨在探究Nicotiflorin对缺血再灌注（Ischemia/Reperfusion,I/R）诱导的AKI的影响及相关分子病理学机制。方法:为探究Nicotiflorin对肾脏缺血再灌注损伤的作用及潜在作用机制,本研究（1）通过双侧肾蒂夹闭45 min,构建C57 BL/6小鼠I/R-AKI模型,术前Nicotiflorin灌胃预处理7天,术后24小时取血液和肾脏组织标本检测不同组别间肾损伤标志物和组织病理损伤的情况;（2）将不同组别（H-R组、Nicotiflorin组和Nicotiflorin+si RNA组）的人肾小管上皮细胞（HK-2）置于缺氧复氧的培养系统中以模拟I/R损伤,探究Nicotiflorin在细胞缺氧复氧时对细胞损伤的作用;（3）通过分子对接技术探究Nicotiflorin发挥作用的潜在机制,并在Nicotiflorin处理的缺氧复氧的HK-2中进行验证。结果:Nicotiflorin可降低I/R-AKI小鼠肾脏组织中caspase3和Bad的表达水平（P<0.05）,上调B细胞淋巴瘤基因-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）的表达（P<0.05）。肾脏组织切片显示,与对照组相比,Nicotiflorin组明显改善了小鼠AKI的组织损伤,减少了炎症细胞的浸润。动物实验提示Nicotiflorin可减轻I/R-AKI引起的肾脏组织损伤和细胞凋亡。在细胞实验中,我们发现当浓度≤75μg/ml时,Nicotiflorin对HK-2细胞没有明显的毒性,从而确定75μg/ml为Nicotiflorin的安全浓度并用于后续的细胞实验中。在缺氧复氧模型中,75μg/ml的Nicotiflorin可保护细胞免受缺氧复氧的影响,具体表现为Nicotiflorin可以减少细胞凋亡数量和降低细胞中促凋亡基因（caspase3、Bad）的表达,这进一步证实了Nicotiflorin对缺氧复氧损伤的HK-2细胞具有一定的保护作用。另外,通过分子对接发现转录激活因子3（Activating Transcription Factor 3,ATF3）与Nicotiflorin的结合能为-9.2,表现出强大的结合潜力。最后我们在细胞实验中证实,当使用si RNA干扰ATF3的表达后,TUNEL结果显示与Nicotiflorin组相比,Nicotiflorin+si RNA组HK-2细胞凋亡数目增多,caspase-3表达水平升高。这提示ATF3是Nicotiflorin在AKI中发挥作用的关键分子。结论:Nicotiflorin对小鼠缺血再灌注损伤的肾脏和缺氧复氧损伤的人肾小管上皮细胞具有保护作用,这种保护作用的潜在机制是Nicotiflorin通过作用于ATF3来抑制肾小管上皮细胞凋亡而实现的。
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